CRISPR) ಮೂರನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಜೀನೋಮ್ ಸಂಪಾದನೆ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ: CRISPR ಜಗತ್ತನ್ನು ಕ್ರಾಂತಿಗೊಳಿಸಿತು.

ಕ್ಲಸ್ಟರ್ಡ್ ರೆಗ್ಯುಲರ್ ಇಂಟರ್‌ಸ್ಪೇಸ್ಡ್ ಶಾರ್ಟ್ ಪ್ಯಾಲಿಂಡ್ರೊಮಿಕ್ ರಿಪೀಟ್ಸ್ (CRISPR) ಎಂಬುದು ಮೂರನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಜೀನೋಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ತಂತ್ರವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ತನ್ನ ಹೆಚ್ಚಿನ-ಥ್ರೂಪುಟ್ ಫಲಿತಾಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಜಗತ್ತನ್ನು ಕ್ರಾಂತಿಗೊಳಿಸಿದೆ. ಇದನ್ನು ವಿವಿಧ ಜೈವಿಕ ಕಾಯಿಲೆಗಳು ಮತ್ತು ಸೋಂಕುಗಳಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ವಿವಿಧ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಪ್ರೊಕಾರ್ಯೋಟ್‌ಗಳು (ಆರ್ಕಿಯಾದಂತಹವು) ಫೇಜ್‌ಗಳ ವಿರುದ್ಧ ರಕ್ಷಿಸಲು CRISPR/Cas9 ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳನ್ನು ಸಹ ಹೊಂದಿವೆ. CRISPR/Cas9-ಆಧಾರಿತ ತಂತ್ರಗಳು ಸಂಭಾವ್ಯವಾಗಿ ಬದಲಾದ ಪ್ರತಿರೋಧ ಜೀನ್‌ಗಳು, ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಮತ್ತು ಎಪಿಜೆನೆಟಿಕ್ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುವ ಮೂಲಕ ಟ್ರಿಪಲ್ ನೆಗೆಟಿವ್ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ (TNBC) ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ತಡೆಯಬಹುದು ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಈ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಗಳು TNBC ಯಲ್ಲಿಯೂ ಸಹ ಕಂಡುಬರುವ ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧದಂತಹ ಸವಾಲಿನ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡಬಹುದು. ಪ್ರಸ್ತುತ, CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಗುರಿ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ತಲುಪಿಸಲು ವಿವಿಧ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಭೌತಿಕ (ಮೈಕ್ರೋಇನ್ಜೆಕ್ಷನ್, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಪೊರೇಷನ್ ಮತ್ತು ಹೈಡ್ರೊಡೈನಾಮಿಕ್ ಮೋಡ್‌ಗಳು), ವೈರಲ್ (ಅಡೆನೊ-ಸಂಬಂಧಿತ ವೈರಸ್ ಮತ್ತು ಲೆಂಟಿವೈರಸ್) ಮತ್ತು ವೈರಲ್ ಅಲ್ಲದ (ಲಿಪೊಸೋಮ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಲಿಪಿಡ್ ನ್ಯಾನೊಪರ್ಟಿಕಲ್ಸ್). )-ಕಣಗಳು. TNBC ಯ ಆಣ್ವಿಕ ಕಾರಣಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ವಿವಿಧ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದ್ದರೂ, ಜೀನೋಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಪರಿಕರಗಳನ್ನು ಇನ್ ವಿವೋದಲ್ಲಿ ತಲುಪಿಸಲು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಮತ್ತು ಉದ್ದೇಶಿತ ವಿಧಾನಗಳ ಕೊರತೆಯು ಅವುಗಳ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಅನ್ವಯವನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಈ ವಿಮರ್ಶೆಯು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರುವ ಪುರಾವೆಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ TNBC ಗಾಗಿ CRISPR/Cas9 ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಪ್ರಗತಿ, ಸವಾಲುಗಳು, ಮಿತಿಗಳು ಮತ್ತು ನಿರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ಸಮಗ್ರವಾಗಿ ಪರಿಶೀಲಿಸುತ್ತದೆ. ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ ಮತ್ತು ಯಂತ್ರ ಕಲಿಕೆಯ ಸಂಯೋಜನೆಯು TNBC ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ CRISPR/Cas9 ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಹೇಗೆ ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು ಎಂಬುದನ್ನು ನಾವು ಎತ್ತಿ ತೋರಿಸುತ್ತೇವೆ.
ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಅನಿಯಂತ್ರಿತ ಕೋಶ ವಿಭಜನೆ, ಕೋಶ ಚಕ್ರ ಚೆಕ್‌ಪಾಯಿಂಟ್‌ಗಳ ಅಡ್ಡಿ ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳಿಂದ (TSGs) ನಿರೂಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ (ಮ್ಯಾಥ್ಯೂಸ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022). ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ, ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಮಹಿಳೆಯರಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯವಾದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಆಗಿದೆ ಮತ್ತು ವಿಶ್ವಾದ್ಯಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮರಣ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (ವಾಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ವೈನರ್, 2019). ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಒಂದು ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಕಾಯಿಲೆಯಾಗಿದ್ದು, ಹಿಸ್ಟೋಲಾಜಿಕಲ್ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಲಕ್ಷಣಗಳು, ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪ್ರಸ್ತುತಿ ಮತ್ತು ನಡವಳಿಕೆ ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಂತಹ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (ವೀಗೆಲ್ಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2010). ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವರ್ಗೀಕರಣವು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಮುನ್ನರಿವಿಗೆ ನಿಖರವಾದ ಒಳನೋಟಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯ ಬಯೋಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ಲಿನಿಕೊಪಾಥೋಲಾಜಿಕಲ್ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳ ಬಳಕೆಯು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವರ್ಗೀಕರಣಕ್ಕೆ ಮುಖ್ಯ ಮಾನದಂಡವಾಗಿದೆ (ತ್ಸಾಂಗ್ ಮತ್ತು ತ್ಸೆ, 2019). ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಮುನ್ನರಿವು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ಈಸ್ಟ್ರೊಜೆನ್ ಗ್ರಾಹಕ (ER), ಪ್ರೊಜೆಸ್ಟರಾನ್ ಗ್ರಾಹಕ (PR), ಮಾನವ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಅಂಶ ಗ್ರಾಹಕ 2 (HER2/neu), ಮತ್ತು ಹಿಸ್ಟೋಲಾಜಿಕಲ್ ದರ್ಜೆ, ಗೆಡ್ಡೆಯ ಪ್ರಕಾರ ಮತ್ತು ದರ್ಜೆಯ ಉಪಸ್ಥಿತಿ ಸೇರಿದಂತೆ ಹಲವಾರು ಅಂಶಗಳಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ. ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ದುಗ್ಧರಸ ಗ್ರಂಥಿಗಳ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ (ಅಲ್-ತುಬೈಟಿ, 2020). ಲುಮಿನಲ್ ಎ, ಲುಮಿನಲ್ ಬಿ, HER2-ಪುಷ್ಟೀಕರಿಸಿದ, ಬೇಸಲ್-ಲೈಕ್ ಮತ್ತು ಕ್ಲೌಡಿನ್-ಲೋ (ಪ್ರಾಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015) ಸೇರಿದಂತೆ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನ ಐದು ಆಂತರಿಕ ಆಣ್ವಿಕ ಉಪವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ. TNBC ಎಂಬುದು ಎಲ್ಲಾ ER, PR ಮತ್ತು HER2 ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನ ಆಣ್ವಿಕ ಉಪವಿಭಾಗವಾಗಿದೆ (ಯಿನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). ಈ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಲಕ್ಷಣಗಳು TNBC ಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ, ಇದು ಯಾವುದೇ ಇತರ ರೀತಿಯ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಿಂತ ಅದರ ತ್ವರಿತ ಪ್ರಗತಿ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ಸ್ವಭಾವವನ್ನು ದೃಢಪಡಿಸುತ್ತದೆ (ಫೆಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2018). ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಪೆರು ಮತ್ತು ಇತರರು (2000) ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಅನ್ನು ಮರುವರ್ಗೀಕರಿಸಲು ಮತ್ತು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನ ಐದು ಆಂತರಿಕ ಉಪವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಮೈಕ್ರೋಅರೇ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸಿದರು (ಕ್ಯಾಡೆನಾಸ್, 2012). ಬೇಸಲ್-ತರಹದ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನ ಉಪವಿಭಾಗವಾಗಿದ್ದು ಅದು ಟ್ರಿಪಲ್-ಋಣಾತ್ಮಕ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ತ್ವರಿತ ಪ್ರಗತಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಬೇಸಲ್ ತರಹದ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ TNBC ಎಂದು ತಪ್ಪಾಗಿ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಕೇವಲ 77% ಮಾತ್ರ TNBC ಆಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಬೇಕು; ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, TNBC ಯ 71–91% ರಷ್ಟು ಬೇಸಲ್ ತರಹದವು, ಈ ಎರಡು ರೀತಿಯ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಅತಿಕ್ರಮಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ವರ್ಗೀಕರಣಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ವಾಂಗ್ ಡಿ.-ವೈ. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). ಇದು ಮುನ್ನರಿವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಲು ಮತ್ತು ಪ್ರಸ್ತುತ ಮತ್ತು ಭವಿಷ್ಯದ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳಿಗೆ ಸಂಭಾವ್ಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು TNBC ಯ ವೈವಿಧ್ಯತೆಯನ್ನು ನಿರೂಪಿಸುವ ಅಗತ್ಯವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, TNBC ಎಲ್ಲಾ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಪ್ರಕರಣಗಳಲ್ಲಿ 15–20% ರಷ್ಟಿದೆ ಮತ್ತು 50 ವರ್ಷಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ವಯಸ್ಸಿನ ಮಹಿಳೆಯರಲ್ಲಿ ಇದು ಹೆಚ್ಚು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ. ಸರಿಸುಮಾರು 20% TNBC ಪ್ರಕರಣಗಳಲ್ಲಿ BRCA1 ಅಥವಾ BRCA2 ರೂಪಾಂತರಗಳು ವರದಿಯಾಗಿವೆ (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2020). ಅಧ್ಯಯನಗಳು TNBC ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ರೋಗನಿರೋಧಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪರಿಸರವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ ನಾಳೀಯ ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಅಂಶಗಳು, ಗೆಡ್ಡೆ-ಸಂಬಂಧಿತ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಫೇಜ್‌ಗಳು (TAM ಗಳು), ಗೆಡ್ಡೆ-ಒಳನುಸುಳುವ ಲಿಂಫೋಸೈಟ್‌ಗಳು (TIL ಗಳು) ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ವಲಸೆಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಇತರ ಅಣುಗಳು ಸೇರಿವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, TNBC ಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪರಿಸರವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು ಅದರ ಮುನ್ನರಿವು ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ (ಫ್ಯಾನ್ ಮತ್ತು ಹೀ, 2022).
TNBC ಯ ಮುನ್ನರಿವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಿಖರವಾದ ರೋಗನಿರ್ಣಯವು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ, ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ER, PR ಮತ್ತು HER2 ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿ (IHC) ಮತ್ತು ಸ್ತನ ನಿಯೋಪ್ಲಾಮ್‌ಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಮ್ಯಾಮೊಗ್ರಫಿಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಮ್ಯಾಮೊಗ್ರಫಿಯು ನೆಕ್ರೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್‌ನಂತಹ ಇಂಟ್ರಾಟ್ಯೂಮರಲ್ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳನ್ನು ಸಮರ್ಪಕವಾಗಿ ಚಿತ್ರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ (ದೀಪಕ್ ಸಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಕಳಪೆ ಮುನ್ನರಿವು ಮತ್ತು ರೋಗನಿರ್ಣಯವು ವೈದ್ಯರು ಸರಿಯಾದ ಔಷಧಿಗಳನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಡೆಯುವುದರಿಂದ (ಚೌಧರಿ, 2020), TNBC ಯ ರೋಗಿಗಳ ಆರೈಕೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ವಿವಿಧ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ, ಎರಡು ಔಷಧಿಗಳು, ಡಾಕ್ಸೊರುಬಿಸಿನ್ ಮತ್ತು ಸೈಕ್ಲೋಫಾಸ್ಫಮೈಡ್ ಅನ್ನು TNBC ಯ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಕಾರ್ಬೋಪ್ಲಾಟಿನ್ ಮತ್ತು ಸಿಸ್ಪ್ಲಾಟಿನ್‌ನಂತಹ ಇತರ ಪ್ಲಾಟಿನಂ ಔಷಧಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಸಿಕೋವ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಓಲಾಪರಿಬ್, ವೆಲಾಪರಿಬ್ ಮತ್ತು PF-01367338 ನಂತಹ PARP ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳನ್ನು TNBC ಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಸಂಭಾವ್ಯ ಕಿಮೊಥೆರಪಿ ಔಷಧಿಗಳಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಇಶಿನೋ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2018). TNBC ಯ ಸಂಭವ ಮತ್ತು ಪ್ರಗತಿಯಲ್ಲಿ Wnt/b-Catenin, NOTCH, ಮತ್ತು Hedgehog ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳು ಭಾಗಿಯಾಗಿವೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಈ ಮಾರ್ಗಗಳಿಗೆ ಔಷಧಿಗಳನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುವುದು ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ತಂತ್ರವಾಗಿರಬಹುದು (Aysola et al., 2013). ಶಸ್ತ್ರಚಿಕಿತ್ಸೆ, ವಿಕಿರಣ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಮತ್ತು ಕಿಮೊಥೆರಪಿ ಇಂದು TNBC ಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಮುಖ್ಯ ಆಧಾರವಾಗಿ ಉಳಿದಿದ್ದರೂ, ಗುರಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆ, ಇಮ್ಯುನೊಥೆರಪಿ, Cas9n, dCas9 ನಂತಹ ವಿವಿಧ CRISPR-ಸಂಬಂಧಿತ ಜೀನ್ ಸಂಪಾದನೆ ಪರಿಕರಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ಹೊಸ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲಾಗಿದೆ. , CRISPR/Cas12, ಪ್ರೈಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್, ಮತ್ತು CRISPR/Cas9-ಉದ್ದೇಶಿತ ಜೀನ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆ. ಇಲ್ಲಿ ನಾವು TNBC ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ವಿವಿಧ CRISPR-ಸಂಬಂಧಿತ ಜೀನ್ ಸಂಪಾದನೆ ಪರಿಕರಗಳ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸುತ್ತೇವೆ. ಅವುಗಳಲ್ಲಿ, CRISPR/Cas9 ವ್ಯಾಪಕ ಗಮನವನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಂಡಿದೆ.
Cas9n, Cas9 ನಿಕೇಸ್ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಇದು CRISPR/Cas9 ಜೀನೋಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ನಿಂದ ಪಡೆದ Cas9 ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ತಳೀಯವಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ರೂಪಾಂತರವಾಗಿದೆ (ಗುಪ್ತಾ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). ಅದರ ಮೂಲ ರೂಪದಲ್ಲಿ, Cas9 ಪ್ರೋಟೀನ್ ಎರಡು ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: RuvC ಮತ್ತು HNH, ಇದರ ಮುಖ್ಯ ಕಾರ್ಯವೆಂದರೆ ಎರಡೂ DNA ಎಳೆಗಳ ಸೀಳುವಿಕೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, Cas9n ನಲ್ಲಿ, ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಡೊಮೇನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾದ HNH, ತಳೀಯವಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಂಡಿದೆ ಮತ್ತು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯವಾಗುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, Cas9n ನ HNH ಡೊಮೇನ್ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸದೆ ಉಳಿದಿದೆ. RuvC ಡೊಮೇನ್ ಮಾತ್ರ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿದೆ, ಇದು Cas9n ಒಂದೇ DNA ಎಳೆಗಳ ಮೇಲೆ ವಿರಾಮಗಳನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಲು ಅಥವಾ ರಚಿಸಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ (ಟ್ರೆವಿನೊ ಮತ್ತು ಜಾಂಗ್, 2014). Cas9 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, Cas9n ಗುರಿಯಿಂದ ಹೊರಗಿರುವ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕೋಶ ದುರಸ್ತಿ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ. ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA ಯಲ್ಲಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸ್ಥಳಗಳಲ್ಲಿ ವಿರಾಮಗಳನ್ನು ರಚಿಸುವಂತಹ ವಿವಿಧ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲು Cas9n ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಈ ಉದ್ದೇಶಕ್ಕಾಗಿ, ಎರಡು Cas9n ಅಣುಗಳನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಿ ಒಟ್ಟಿಗೆ ಬಳಸಲಾಯಿತು (ಯೀ, 2016). ಮಿಶ್ರ ವಂಶಾವಳಿ ಕೈನೇಸ್ 3 (MLK3) ಎಂಬುದು ಮೈಟೊಜೆನ್-ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದು TNBC ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ನಿಯಂತ್ರಕವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ (ಕ್ರೋನನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2012).
MLK3 TNBC ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಬಹು ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, c-Jun N-ಟರ್ಮಿನಲ್ ಕೈನೇಸ್ (JNK) ಮಾರ್ಗವು ಜೀವಕೋಶ ಚಲನಶೀಲತೆ ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಅವನತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು MLK3 JNK ಮಾರ್ಗವನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಜೀವಕೋಶ ಚಲನಶೀಲತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ (ರಟ್ಟನಸಿಂಚೈ ಮತ್ತು ಗ್ಯಾಲೊ, 2016). MLK3 EMT ಅನ್ನು ಸಹ ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ. ಇದನ್ನು ಮಾಡಲು, ಇದು ಸ್ನೇಲ್, ಸ್ಲಗ್ ಮತ್ತು ಟ್ವಿಸ್ಟ್‌ನಂತಹ ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಅಂಶಗಳು ಎಪಿಥೀಲಿಯಲ್ ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮೆಸೆಂಕಿಮಲ್ ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಟಿಕ್ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಸ್ವಾಧೀನಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ (ಕ್ಯಾಸಲಿನೊ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2023). ECM ಅನ್ನು ಕೆಡಿಸುವ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಮೆಟಾಲೊಪ್ರೋಟೀನೇಸ್‌ಗಳ (MMPs) ನಂತಹ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್‌ಗಳ ECM ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ MLK3 ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ. ಇದು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಕೋಶಗಳ ಆಕ್ರಮಣವನ್ನು ಸುಗಮಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ದೂರದ ಸ್ಥಳಗಳಿಗೆ ಹರಡುತ್ತದೆ (ಕಟಾರಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). ಹೀಗಾಗಿ, ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು TNBC ಯಲ್ಲಿ MLK3 ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ. ರಟ್ಟನಸಿಂಚೈ ಮತ್ತು ಗ್ಯಾಲೊ MLK3 ಪಾತ್ರವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು TNBC ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿದರು ಮತ್ತು ಇದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳ ಮೂಲಕ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಕೊಂಡರು. ಅವರು MLK3 ಅನ್ನು ಸಂಪಾದಿಸಲು CRISPR/Cas9n ಅನ್ನು ಬಳಸಿದರು ಮತ್ತು TNBC ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಕಡಿತವನ್ನು ಗಮನಿಸಿದರು (ರಟ್ಟನಸಿಂಚೈ ಮತ್ತು ಗ್ಯಾಲೊ, 2016).
dCas9, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯ Cas9 ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಇದು Cas9 ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಉತ್ಪನ್ನ ರೂಪವಾಗಿದೆ. ಸಕ್ರಿಯ Cas9 ಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ, dCas9 ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಇದು DNA ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ವಿರಾಮಗಳನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವುದಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ, DNA ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಯಾವುದೇ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಅಥವಾ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳಿಲ್ಲದೆ ಜೀನೋಮ್‌ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಗುರಿಯಾಗಿಸಲು dCas9 ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು (ವಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2016). dCas9 ನಲ್ಲಿ, ಎರಡು ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು, RuvC ಮತ್ತು HNH, ಪ್ರಮುಖ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲದ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುವ ಮೂಲಕ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. (ರಿಕ್ಟರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2016). DNA ಸೀಳು ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಕೊರತೆಯ ಹೊರತಾಗಿಯೂ, dCas9 ಜೆನೆಟಿಕ್ ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದಲ್ಲಿ ಹಲವಾರು ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರಗಳನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಇದು ಜೀನೋಮ್‌ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರದೇಶಗಳ ದೃಶ್ಯೀಕರಣವನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ, ಪ್ರತಿಲೇಖನ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು ಸುಗಮಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎಪಿಜೆನೆಟಿಕ್ ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ (ಬ್ರಾಕೆನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2018).
ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಅಂಶ ZEB1 (ಜಿಂಕ್ ಫಿಂಗರ್ ಇ-ಬಾಕ್ಸ್ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಹೋಮಿಯೋಬಾಕ್ಸ್ 1) ಭ್ರೂಣದ ಬೆಳವಣಿಗೆ, ಅಂಗಾಂಶ ದುರಸ್ತಿ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಪ್ರಗತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸುವ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಾದ ಎಪಿಥೇಲಿಯಲ್-ಮೆಸೆಂಕಿಮಲ್ ಪರಿವರ್ತನೆ (EMT) ಅನ್ನು ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸುವಲ್ಲಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮತ್ತು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಇದು ಎಪಿಥೇಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮೆಸೆಂಕಿಮಲ್ ಕೋಶಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಜೀವಕೋಶ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನ, ಚಲನಶೀಲತೆ, ಆಕ್ರಮಣಶೀಲತೆ ಇತ್ಯಾದಿಗಳಲ್ಲಿ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಉಂಟಾಗುತ್ತವೆ (ವು ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). TNBC ಯಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶ-ಕೋಶ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಎಪಿಥೇಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳ ಧ್ರುವೀಯತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಕಾರಣವಾಗಿರುವ ಇ-ಕ್ಯಾಥೆರಿನ್ ಮತ್ತು ಆಕ್ಲೂಡಿನ್‌ನಂತಹ ಬಹು ಎಪಿಥೇಲಿಯಲ್ ಗುರುತುಗಳನ್ನು ZEB1 ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ (ಮೊರೆನೊ-ಬ್ಯೂನೊ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2008). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ZEB1 N-ಕ್ಯಾಥೆರಿನ್, ವಿಮೆಂಟಿನ್ ಮತ್ತು ಫೈಬ್ರೊನೆಕ್ಟಿನ್ (ಕೊನ್ರಾಡಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2014) ನಂತಹ ಕೆಲವು ಗುರುತುಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ರೋ GTPases ಮತ್ತು ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಮೆಟಾಲೊಪ್ರೋಟೀನೇಸ್‌ಗಳು (MMPs) (ಹುವಾಂಗ್) ನಂತಹ ಸೈಟೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಹ ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ (ಹುವಾಂಗ್). ಮತ್ತು ಇತರರು, 2014). 2022), ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಇದು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಅಂಶ-β (TGF-β), Wnt ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಪರಿವರ್ತಿಸುವಂತಹ ವಿವಿಧ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳ ಮೇಲೂ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ TNBC ಯಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಆಕ್ರಮಣ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ (ಚೆನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2016). ಹಲವಾರು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಮತ್ತು ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಪುರಾವೆಗಳು ZEB1 TNBC ಯ ಪತ್ತೆ ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪಕ್ಕೆ ಅಮೂಲ್ಯವಾದ ಏಜೆಂಟ್ ಆಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ಇತ್ತೀಚಿನ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ವಾರ್ಯಾ ಮತ್ತು ಇತರರು TNBC ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಳಸಿದರು ಮತ್ತು dCas9 ನಿಂದ ZEB1 ನ ಸಂಪೂರ್ಣ ನಿಗ್ರಹವನ್ನು ಸಾಧಿಸಿದರು. ಹೀಗಾಗಿ, ಅವರು ಇನ್ ವಿವೋ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ZEB1 ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಬಹುತೇಕ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ರತಿಬಂಧವನ್ನು ಗಮನಿಸಿದರು (ವಾರ್ಯಾ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2023).
CRISPR/Cas12 ಎಂಬುದು CRISPR/Cpf1 ಎಂಬ ಜೀನ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಟೂಲ್ ಆಗಿದೆ. ಇದು CRISPR/Cas ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ ಬಂದಿದೆ, ಅಲ್ಲಿ Cas12 ಎಂಬ ಪದವು CRISPR-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್ 12 ಅನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಭರತ್‌ಕುಮಾರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022), ಇದು Cas9 ಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಹೋಲುತ್ತದೆ. ಒಂದೇ ವ್ಯತ್ಯಾಸವೆಂದರೆ ಇದು Cas12 ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. Cas9 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, Cas12 ಜೀನ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಜಿಗುಟಾದ ತುದಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವಂತಹ ಕೆಲವು ವಿಶಿಷ್ಟ ಕಾರ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ Cas9 ಮೊಂಡಾದ ತುದಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ (ವಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). Cas12 ನ ಈ ಗುಣವು ಅದರ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ DNA ಕುಶಲ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಕ್ಕೆ ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಗುರಿ DNA ಅನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಗುರುತಿಸುವ ಮತ್ತು ಕತ್ತರಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿ, ಇದು ಅಸಾಧಾರಣ ಬಹುಮುಖತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಜೀನ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಸೇರಿದಂತೆ ವಿವಿಧ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಿಗೆ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಸಾಧನವಾಗಿದೆ (ಪಿಕ್ಕರ್-ಆಲಿವರ್ ಮತ್ತು ಗೆರ್ಸ್‌ಬಾಚ್, 2019).
ಇತರ CRISPR ರೂಪಾಂತರಗಳಂತೆಯೇ, CRISPR/Cas12 ಸಹ TNBC ಯಲ್ಲಿ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ನಾಕ್ಔಟ್ ಮಾಡುವ ಅಥವಾ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಅದರ ರೋಗಕಾರಕತೆ ಅಥವಾ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುವ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿರಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ (ಯಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಜಾಂಗ್, 2023). ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು, Cas12 ಅನ್ನು ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗೆ ನಿರ್ದೇಶಿಸುವ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ RNA (gRNA) ಅನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಯಿತು. Cas12 ತನ್ನ ಗುರಿಗೆ ಬಂಧಿಸಿದ ನಂತರ, ಅದು DNA ಯಲ್ಲಿ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಬ್ರೇಕ್‌ಗಳನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು DNA ದುರಸ್ತಿ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ದುರಸ್ತಿ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ತಪ್ಪಾದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು, ಇದು ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯದ ನಷ್ಟಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ (ಜಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021a). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು Cas12 ಕಿಣ್ವದ ಸುಧಾರಿತ ಆವೃತ್ತಿಯನ್ನು (dCas12 ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ) ಸಹ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಇದನ್ನು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಕೆಲವು ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಅವುಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು. ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್‌ಗಳ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (ಸುಲ್ತಾನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022).
ಪ್ರೈಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಎನ್ನುವುದು ಹೊಸದಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾದ ಮತ್ತು ಅತ್ಯಂತ ಉತ್ಕೃಷ್ಟವಾದ ಜೀನೋಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ. ಇದು ಜೀವಿಯ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಅತ್ಯಂತ ನಿಖರವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (ಚೆನ್ ಮತ್ತು ಲಿಯು, 2023). ಪ್ರೈಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಎರಡು ಮುಖ್ಯ ಘಟಕಗಳ ಏಕೀಕರಣದ ಮೂಲಕ ಸಾಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ: ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ CRISPR/Cas9 ಕಿಣ್ವ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್. CRISPR/Cas9 ಕಿಣ್ವದ ಪಾತ್ರವು ಜೀನೋಮ್‌ನಲ್ಲಿ ನಿಖರವಾದ ಸೈಟ್‌ಗಳನ್ನು ಆಯ್ದವಾಗಿ ಗುರಿಯಾಗಿಸುವುದು, ಆದರೆ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಗುರಿ ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ (ಹಸ್ಸನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಪ್ರೈಮರ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದಲ್ಲಿ, ಮೊದಲ ಹಂತವು ಪ್ರೈಮರ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಗೈಡ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ (ಪೆಗ್‌ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ) (ಸ್ಟ್ಯಾಂಡೇಜ್-ಬೀಯರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021) ರಚನೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಇದು ಗುರಿ ಡಿಎನ್‌ಎಯಲ್ಲಿ ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಸೈಟ್‌ಗೆ ಅನುಗುಣವಾದ ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ನಂತರ ಪೆಗ್‌ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ (PE2) ಜೊತೆಗೆ ಗುರಿ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಪರಿಚಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. PE2 ಎಂಬುದು ಕ್ಯಾಸ್9 ಕಿಣ್ವ, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಅಡಾಪ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದೆ (ಮಾರ್ಟಿನ್-ಅಲೋನ್ಸೊ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಜೀವಕೋಶದ ಒಳಗೆ, pegRNA ಮತ್ತು PE2 ಸಂಕೀರ್ಣಗಳು ಅವು ಮಾರ್ಪಡಿಸಲು ಬಯಸುವ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ DNA ಗಾಗಿ ಹುಡುಕುತ್ತವೆ. Cas9 ಕಿಣ್ವವು DNA ಯನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಿ ಏಕ ಎಳೆಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ರಚಿಸುತ್ತದೆ (ಚೋಯ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022). ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಈ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು DNA ಯನ್ನು ಸಂಪಾದನೆಗಾಗಿ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುತ್ತದೆ. DNA ನಕಲಿಸುವುದರ ಜೊತೆಗೆ, RNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಸಂಪಾದಿಸುವ ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಸಹ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಹೊಸದಾಗಿ ರಚಿಸಲಾದ DNA ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು DNA ಯಲ್ಲಿನ ವಿರಾಮವನ್ನು ಸರಿಪಡಿಸಲು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಮಾರ್ಪಾಡು ಹೊಂದಿರುವ ಬದಲಾದ DNA ಅನುಕ್ರಮ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ (Ochoa-Sanchez ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಪ್ರೈಮರ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾದ ರೂಪಾಂತರಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು. ಇದು ಪಾಯಿಂಟ್ ರೂಪಾಂತರಗಳು, ಅಳವಡಿಕೆಗಳು, ಅಳಿಸುವಿಕೆಗಳು ಮತ್ತು ಜೀನ್ ಬದಲಿಗಳನ್ನು ಸಹ ಗುರಿಯಾಗಿಸಬಹುದು (Anzalone ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019; Chen and Liu, 2023). ಪ್ರೈಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಹಿಂದಿನ ಜೀನೋಮ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳಿಗಿಂತ ಹಲವಾರು ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ. ಇವುಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿದ ನಿಖರತೆ, ಕಡಿಮೆಯಾದ ಆಫ್-ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಪರಿಣಾಮಗಳು ಮತ್ತು DNA ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಬ್ರೇಕ್‌ಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸದೆ DNA ಯನ್ನು ಸಂಪಾದಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಸೇರಿವೆ (Anzalone ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020).
CRISPR/Cas9 ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಮೂಲತಃ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ವರ್ಗಾವಣೆ ಮತ್ತು ಫೇಜ್ ಸೋಂಕಿನಿಂದ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾವನ್ನು ರಕ್ಷಿಸಲು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ ಅದನ್ನು ಜೀನೋಮ್ ಸಂಪಾದನೆಗಾಗಿ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ RNA-ಆಧಾರಿತ DNA ಗುರಿ ಸಾಧನವಾಗಿ ಮರುಬಳಕೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು (ಜಿಯಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಡೌಡ್ನಾ, 2017). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, CRISPR/Cas9 ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಕ್ರಮವಾಗಿ 50% ಮತ್ತು 87% ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಮತ್ತು ಆರ್ಕಿಯಲ್ ಜೀನೋಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ (ಇಶಿನೋ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2018). CRISPR/Cas9 ಇನ್ ವಿವೋ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮೋಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಯಾವುದೇ ಅಸಹಜ ಆನುವಂಶಿಕ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಅಳಿಸಲು, ಸೇರಿಸಲು ಮತ್ತು ಸರಿಪಡಿಸಲು ಸಂಭಾವ್ಯ ಸಾಧನವಾಗಿದೆ (ಸಬಿತ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಇದಲ್ಲದೆ, ಆಸಕ್ತಿಯ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗಳಿಗೆ ಅದರ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯಿಂದಾಗಿ CRISPR/Cas9 ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಭಾಗವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚೆನ್ ಮತ್ತು ಜಾಂಗ್, 2018).
CRISPR/Cas9 Cas9 ಮತ್ತು ಒಂದೇ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ RNA (sgRNA) ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. Cas9 ಬಹು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಘಟಕಗಳಿಂದ ಕೂಡಿದ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಆಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, Cas9 ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ರಚನಾತ್ಮಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ (Pacesa et al., 2022) ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಎರಡು ಹಾಲೆಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ (REC) ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ (NUC). REC ಹಾಲೆಯನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಮೂರು ಪ್ರದೇಶಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ: REC1, REC2, ಮತ್ತು ಸೇತುವೆ ಹೆಲಿಕ್ಸ್ (ಕ್ರೋಮ್‌ವೆಲ್ et al., 2018). NUC ಮೂರು ಹಾಲೆಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೋಸ್ಪೇಸರ್ ಪಕ್ಕದ ಮೋಟಿಫ್ (PAM) ಸಂವಹನ ಡೊಮೇನ್ (ಚಿತ್ರ 1) (ಸಾಂಗ್ et al., 2016). sgRNA CRISPR RNA (crRNA) ಮತ್ತು ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಸಣ್ಣ RNA (ಟ್ರೇಸರ್ RNA) ಸೇರಿದಂತೆ ಎರಡು ಘಟಕಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ (ಚಿತ್ರ 1). sgRNA, Cas9 ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಕನೆಕ್ಸಿನ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಕ್ರಿಯ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಎಫೆಕ್ಟರ್ ಕಾಂಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ (ರಿಕ್ಟರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2012). crRNA ಒಂದು 18-20 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಯಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಗುರಿ DNA ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುವಲ್ಲಿ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, crRNA ಗುರಿ DNA ಯೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು tracrRNA ಗುರಿ DNA ಯನ್ನು ಬಂಧಿಸಲು Cas9 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಸ್‌ಗೆ ಸ್ಕ್ಯಾಫೋಲ್ಡ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ (ಮಂಗ್ವಾರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, PAM ಅನುಕ್ರಮವು 3 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಎಫೆಕ್ಟರ್ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು DNA ಗೆ ಬಂಧಿಸುವುದನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸುತ್ತದೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆ ವಹಿಸುತ್ತದೆ. Cas9 ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣ ಉಪಘಟಕಗಳಾದ RuvC ಮತ್ತು HNH ವೇಗವರ್ಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ (ರಿಕ್ಟರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2012; ಅಸ್ಮಾಮಾವ್ ಮತ್ತು ಜಾವ್ಡಿ, 2021). Cas9 ಉಪಘಟಕದ HNH ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೇಸ್ ಡೊಮೇನ್ crRNA ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ DNA ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ಸೀಳುತ್ತದೆ. RuvC ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಡೊಮೇನ್ ಇತರ DNA ಎಳೆಗಳನ್ನು ಸೀಳಿ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಬ್ರೇಕ್‌ಗಳನ್ನು (DSBs) ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ, ಅದರ ನಂತರ ಎರಡು ವಿಭಿನ್ನ DNA ಬ್ರೇಕ್ ರಿಪೇರಿ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ (ಜಿಯಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಡೌಡ್ನಾ, 2017) (ಚಿತ್ರ 1).
ಚಿತ್ರ 1. CRISPR/Cas9 (A) ನ ಅವಲೋಕನ. CRISPR/Cas9 ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಘಟಕಗಳು: (i). Cas9 ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಗುರಿ DNA ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಲು ಕಾರಣವಾಗಿದೆ, (ii) crRNA ಮತ್ತು tra-crRNA ಚೈಮೆರಾಗಳ ಸಮ್ಮಿಳನದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಏಕ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ (sg) RNA. (ಎರಡು). Cas9 Rec I, Rec II, NUC ಲೋಬ್ (HNH ಮತ್ತು Ruv C ಉಪಘಟಕಗಳು) ಮತ್ತು ಅನುಗುಣವಾದ ಕಾರ್ಯಗಳೊಂದಿಗೆ PAM ಸಂವಹನ ಡೊಮೇನ್ (C) ನಂತಹ ಹಲವಾರು ಘಟಕಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. CRISPR/Cas9 ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣವು DNA ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಪೂರಕವಲ್ಲದ ಮತ್ತು ಪೂರಕ ರೂಪಗಳಾಗಿ ವಿಭಜಿಸುತ್ತದೆ (D). CRISPR/Cas9 ಜೀನೋಮ್ ಅನ್ನು ಮೂರು ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಪಾದಿಸುತ್ತದೆ: ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ, ಕತ್ತರಿಸುವುದು ಮತ್ತು ದುರಸ್ತಿ. ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ sg-RNA Cas9 ಗೆ ಮಾರ್ಗದರ್ಶನ ನೀಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಘಟಕ crRNA ಮೂಲಕ ಬಯಸಿದ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ. Cas9 5′-NGG-3′ ನಲ್ಲಿ PAM ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಗುರುತಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು DNA ಅನ್ನು ಕರಗಿಸುತ್ತದೆ, DNA-RNA ಹೈಬ್ರಿಡ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸೀಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. Cas9 ನ HNH ಡೊಮೇನ್ ಪೂರಕ ಎಳೆಯನ್ನು ಸೀಳುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು RuvC ಡೊಮೇನ್ ಪೂರಕವಲ್ಲದ ಎಳೆಯನ್ನು ಸೀಳುತ್ತದೆ. CRISPR/Cas9 dsDNA ಅನ್ನು ಎರಡು ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ಒಡೆಯುವ ಮೂಲಕ ದುರಸ್ತಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ: ನಾನ್-ಹೋಮೋಲೋಗಸ್ ಎಂಡ್ ಜಾಯಿನಿಂಗ್ (NHEJ) ಮತ್ತು ಹೋಮೋಲೋಗಸ್-ಡೈರೆಕ್ಟೆಡ್ ರಿಪೇರಿ (HDR). NHEJ ವಿದೇಶಿ ಹೋಮೋಲೋಗಸ್ DNA ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA ಅನ್ನು ಕಿಣ್ವಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಮೂಲಕ ದುರಸ್ತಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ DNA ಅನುಕ್ರಮಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಅಥವಾ ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ದೋಷ-ಪೀಡಿತ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವಾಗಿದೆ. HDR ಬಹಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೋಮೋಲೋಗಸ್ DNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ.
CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ದುರಸ್ತಿ ಮಾರ್ಗಗಳು ನಾನ್-ಹೋಮೋಲೋಗಸ್ ಎಂಡ್ ಜಾಯಿನಿಂಗ್ (NHEJ) ಮತ್ತು ಹೋಮೋಲಜಿ-ಡೈರೆಕ್ಟೆಡ್ ರಿಪೇರಿ (HDR) ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿವೆ. NHEJ ದೋಷ-ಪೀಡಿತ ಮಾರ್ಗವಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಅಳವಡಿಕೆ ಅಥವಾ ಅಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ದುರಸ್ತಿ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಮಾದರಿಯ ಅಗತ್ಯವಿರುವುದಿಲ್ಲ. ಇದು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ (ಅಬ್ಬಾಸಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಈ ದುರಸ್ತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು KU ಸಂಕೀರ್ಣ, ಅಡ್ಡ-ಪೂರಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಂಕೀರ್ಣ ಟೈಪ್ 4 (XRCC-4), DNA ಅಂತ್ಯ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ಕಿಣ್ವ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್ DNA-PKcs (ಅಬ್ಬಾಸಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021) ನಂತಹ ನಾಲ್ಕು ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. KU ಸಂಕೀರ್ಣ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಎರಡು ಉಪಘಟಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, Ku 70 ಮತ್ತು Ku 80, ಮತ್ತು NHEJ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ದುರಸ್ತಿ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಎರಡು ಉಪಘಟಕಗಳನ್ನು (Ku 70 ಮತ್ತು Ku 80) ಗುರಿ DNA ಯ ಮೊಂಡಾದ ಅಥವಾ ಬಹುತೇಕ ಮೊಂಡಾದ ತುದಿಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಅಬ್ಬಾಸಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021), ಗಾಯದ ಸ್ಥಳಕ್ಕೆ ಇತರ NHEJ-ಸಂಬಂಧಿತ ಅಂಶಗಳನ್ನು ನೇಮಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಸ್ಕ್ಯಾಫೋಲ್ಡ್ ಆಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ (ಯಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). XRCC-4 ಮತ್ತು DNA ಲಿಗೇಸ್ ಕ್ರಮವಾಗಿ 334 ಮತ್ತು 911 ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳಿಂದ ಕೂಡಿದೆ ಮತ್ತು XRCC4-DNA ಲಿಗೇಸ್ IV ಸಂಕೀರ್ಣವು DNA ತುದಿಗಳ ಬಂಧನವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ (ಚಟರ್ಜಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015). ಪಾಲಿನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಕೈನೇಸ್ 3′-ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ DNA ಅಂತ್ಯ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ಕಿಣ್ವವಾಗಿದೆ. ಇದು DNA ಯಲ್ಲಿ 3′P ಗುಂಪನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು ಮತ್ತು DSB ದುರಸ್ತಿ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 5′OH ಗುಂಪನ್ನು ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಟ್ ಮಾಡಬಹುದು. ಇದು SSB ದುರಸ್ತಿ ಮಾರ್ಗವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಬ್ರೇಕ್‌ಗಳ (SSBs) ದುರಸ್ತಿಯನ್ನು ಸಹ ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ (ಚಟರ್ಜಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015). ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್ DNA-PKcs ಎಂಬುದು DNA-ಅವಲಂಬಿತ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದು PIKKs (ಫಾಸ್ಫಾಟಿಡಿಲಿನೋಸಿಟಾಲ್ 3-ಕೈನೇಸ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಕೈನೇಸ್‌ಗಳು) ಮತ್ತು ಅಟಾಕ್ಸಿಯಾ ಟೆಲಂಜಿಯೆಕ್ಟಾಸಿಯಾ ರೂಪಾಂತರಿತ (ATM) ಕುಟುಂಬದ ವೇಗವರ್ಧಕ ಉಪಘಟಕವನ್ನು ಹಾಗೂ ATM ಮತ್ತು Rad3-ಸಂಬಂಧಿತ ATR ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಬ್ರೇಕ್‌ಗಳು (DSBs) ಮತ್ತು ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಬ್ರೇಕ್‌ಗಳು (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016).
HDR ಹೆಚ್ಚು ನಿಖರ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ತವಾದ ದುರಸ್ತಿ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಹೋಮೋಲೋಗಸ್ DNA ಡ್ಯೂಪ್ಲೆಕ್ಸ್‌ನ ಅಖಂಡ ರೂಪವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಕಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಆದರೂ ಇದಕ್ಕೆ ಸಹೋದರಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟಿಡ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಇದು ಸಸ್ತನಿ ಕೋಶ ಚಕ್ರದ S/G2 ಹಂತದಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ. HDR ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಯೀಸ್ಟ್ ಪ್ರಭೇದಗಳಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ NHEJ ಸಸ್ತನಿಗಳಲ್ಲಿ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ (ಬರ್ಮಾ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2006; ಅಬ್ಬಾಸಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಸಂಪೂರ್ಣ ದುರಸ್ತಿ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಚಿತ್ರ 1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.
TNBC ಆನುವಂಶಿಕ ಮತ್ತು ಎಪಿಜೆನೆಟಿಕ್ ಅಸಹಜತೆಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವುದರಿಂದ, CRISPR/Cas9 ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಾರಕ ಜೀನೋಮಿಕ್/ಎಪಿಜೆನೊಮಿಕ್ ಅಸಹಜತೆಗಳ ತಿದ್ದುಪಡಿ ಒಂದು ಸಮಂಜಸವಾದ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ವಿಧಾನವಾಗಿರಬಹುದು (ಚೆನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಕೋಶ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಕೆಲವು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಅಂಶಗಳು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ವಿಶಿಷ್ಟ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಬಹುದು, ಇದು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ನಿಯಂತ್ರಣವು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಡ್ರೋಸ್ಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2017). ಜೆನೆಟಿಕ್, ಎಪಿಜೆನೆಟಿಕ್ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ದೋಷಗಳಂತಹ ಗೆಡ್ಡೆಗಳ ಈ ಆಣ್ವಿಕ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳನ್ನು ಔಷಧ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುವುದರಿಂದ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ವೆಚ್ಚವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು. CRISPR ಒಂದು ಸಂಭಾವ್ಯ ಜೀನ್ ಎಡಿಟಿಂಗ್ ಸಾಧನವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಉಂಟುಮಾಡುವ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಗುರಿಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಮತ್ತು ಗುರುತಿಸಲು ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ, ಮಾನವ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಆಂಕೊಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಂಪಾದಿಸಲು, ನಿಗ್ರಹಿಸಲು ಮತ್ತು ಎಪಿಜೆನೆಟಿಕ್ ಆಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು (ಟೇಬಲ್ 1) (ಅಹ್ಮದ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕಗಳು, ಆಂಕೊಜೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಹುಡುಕಲು ಹಲವಾರು CRISPR ಪರದೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ. ವಿವಿಧ TNBC ಆಂಕೊಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಂಪಾದಿಸಲು CRISPR/Cas9 ಬಳಕೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರ 2 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಚಿತ್ರ 2. CRISPR/Cas9 ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿವಿಧ TNBC ಆಂಕೊಜೀನ್‌ಗಳ ಜೀನ್ ಸಂಪಾದನೆಯು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಈ ಆಂಕೊಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 ಮತ್ತು CXCR7, Crypto1, ROR1 ಮತ್ತು ST8SIA ಸೇರಿವೆ, ಇವು TNBC ಯ ಸಂಭವ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಕೊಂಡಿವೆ.
ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶ ವಲಸೆ, ಆಕ್ರಮಣ ಮತ್ತು ಎಪಿಥೇಲಿಯಲ್-ಮೆಸೆಂಕಿಮಲ್ ಪರಿವರ್ತನೆ (EMT) ITGA9 ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ. ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ITGA9 ನಾಚ್ ಮಾರ್ಗದಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ರಾಬ್ಡೋಮಿಯೊಸಾರ್ಕೊಮಾ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಆಸಕ್ತಿದಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ (ಮೋಲಿಸ್ಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಹಲವಾರು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಪ್ರಕಾರಗಳಲ್ಲಿ ರೋಗಿಯ ಮುನ್ನರಿವಿನೊಂದಿಗೆ ITGA9 ನಿಕಟ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ (ವಾಂಗ್ Z. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ITGA9 ನ ಬಯೋಇನ್ಫರ್ಮ್ಯಾಟಿಕ್ಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು TNBC ಯಲ್ಲಿ ಅದರ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಇತರ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಉಪವಿಭಾಗಗಳಿಗಿಂತ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. ಎತ್ತರದ ITGA9 ಮಟ್ಟಗಳು TNBC ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಮರುಕಳಿಸುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ. CRISPR/Cas9 ನಿಂದ ITGA9 ನ ನಾಕ್ಔಟ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕಾಂಡಕೋಶ (CSC)-ತರಹದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು, ಗೆಡ್ಡೆಯ ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್, ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು TNBC ಯಲ್ಲಿ β-ಕ್ಯಾಟೆನಿನ್ ಅವನತಿಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು (ವಾಂಗ್ Z. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019).
ಕ್ರಿಪ್ಟೋ-1 TGF-β ಕುಟುಂಬದ ಸದಸ್ಯ ಮತ್ತು ಆರಂಭಿಕ ಭ್ರೂಣಜನಕ, ಕಾಂಡಕೋಶ ನಿರ್ವಹಣೆ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ (ಇಶಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). Tdgf-1 ಎಂದೂ ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಇದು, ಪ್ರಾಚೀನ ಸ್ಟ್ರೀಕ್, ಮೆಸೋಡರ್ಮ್ ಮತ್ತು ಎಂಡೋಡರ್ಮ್‌ನ ರಚನೆಯ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಆಂಕೊಜೆನಿಕ್ GPI-ಆಂಕರ್ಡ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದ್ದು, ಭ್ರೂಣಜನಕದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ದೇಹದ ಅಂಗಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಲ್ಲಿ ಎಡ/ಬಲ ಅಸಿಮ್ಮೆಟ್ರಿಯನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸುತ್ತದೆ (ಜಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021b). ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಕ್ರಿಪ್ಟೋ-1 ಕಾಂಡಕೋಶ ಮಾರ್ಕರ್ ಆಗಿ ಎಪಿಥೇಲಿಯಲ್-ಮೆಸೆಂಕಿಮಲ್ ಪರಿವರ್ತನೆಯಲ್ಲಿ (EMT) ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಜಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021b). ಭ್ರೂಣದ ಬೆಳವಣಿಗೆ, ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಗಾಯದ ಗುಣಪಡಿಸುವಿಕೆಯಂತಹ ವಿವಿಧ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ, ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಆಕ್ರಮಣ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ಗೆ EMT ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಕ್ರಿಪ್ಟೋ-1 ನಾಲ್ಕು ನಾಚ್ ಗ್ರಾಹಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಅನುವಾದದ ನಂತರದ ಪಕ್ವತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಬ್ರಾಂಡ್‌ಸ್ಟಾಡ್ಟರ್ ಮತ್ತು ಮೈಲಾರ್ಡ್, 2019). ನಾಚ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗವು ಮಾನವ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ನಿರ್ವಹಣೆಯಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ. ಕ್ರಿಪ್ಟೋ-1 ನ CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ನಾಕ್ಔಟ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಕ್ರಿಪ್ಟೋ-1 TNBC ಗೆ ಪ್ರಮುಖ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಗುರಿಯಾಗಬಹುದು (ಕ್ಯಾಸ್ಟ್ರೋ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015).
XCL12 ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮತ್ತು ಅದರ ಕೀಮೋಕಿನ್ ಗ್ರಾಹಕ CXC (CXCR4 ಮತ್ತು CXCR7) ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣ, ಬೆಳವಣಿಗೆ, ವಲಸೆ ಮತ್ತು ಆಕ್ರಮಣದಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಪಾತ್ರಗಳನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತವೆ (Wu et al., 2015). ಈ ಕೀಮೋರೆಸೆಪ್ಟರ್‌ಗಳು ಇನ್ ವಿವೋ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಬಹು ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳ ಮೂಲಕ TNBC ಯ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ (Wu et al., 2015). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, CXCR4 ಮತ್ತು CXCR7 ನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯು TNBC ಯಲ್ಲಿ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಒಳಗಾಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಕಳಪೆ ಮುನ್ನರಿವಿನೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ (ಕಾರ್ನ್ et al., 2022). ಆದ್ದರಿಂದ, CXCR4 ಮತ್ತು CXCR7 ನ ನಾಕ್ಔಟ್ TNBC ಸೇರಿದಂತೆ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಔಷಧ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗಳಾಗಿ ಪರಿಣಮಿಸಬಹುದು. ಯಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ನಡೆಸಿದ ಅಧ್ಯಯನ. ಯಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು (2019) CXCR4 ಮತ್ತು CXCR7 ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಹ-ನಾಕ್ಔಟ್ ಮಾಡಲು CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಬಳಸಿದರು ಮತ್ತು TNBC ಪ್ರಸರಣ, ಬೆಳವಣಿಗೆ, ವಲಸೆ ಮತ್ತು ಆಕ್ರಮಣವನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದೆ (ಯಾಂಗ್ et al., 2019).
ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ TNBC ಆಂಕೊಜೀನ್ ಆಗಿರುವ miR-3662 ನ ಹೆಚ್ಚಿದ ಮಟ್ಟಗಳು ಕಂಡುಬಂದಿವೆ (ಯಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022). miR-3662 ನ ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ವಿವೋ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಎರಡರಲ್ಲೂ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಅಗರ್ವಾಲ್ ಮತ್ತು ಗುಪ್ತಾ, 2021). HBP-1 Wnt/-catenin ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ಪ್ರಬಲ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು TNBC ಜೀವಕೋಶಗಳ miR-3662-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ. ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, Yi ಮತ್ತು ಇತರರು. miR-3662-HBP1 ಅಕ್ಷವು TNBC ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ Wnt/-catenin ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದೆ (ಯಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022). ಅದರ ಗೆಡ್ಡೆ-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯಿಂದಾಗಿ, miR-3662 TNBC ಗೆ ಸಂಭಾವ್ಯ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಗುರಿಯಾಗಿರಬಹುದು. ಹೀಗಾಗಿ, TNBC ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಹೊಸ ಔಷಧಿಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು miR-3662 ನ CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ವಿಧಾನವಾಗಿರಬಹುದು.
UBR5 ಎಂಬುದು 300 kDa ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಫಾಸ್ಫೋಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದನ್ನು ವಿವಿಧ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಟ್ಯೂಮರಿಜೆನೆಸಿಸ್, ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪ್ರಮುಖ ನಿಯಂತ್ರಕವೆಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ (ಶಿಯರರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015; ಫೂ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2023). UBR5 ಅನ್ನು TNBC ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಯುಬಿಕ್ವಿಟಿನ್ ಲಿಗೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೂಲಕ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುವ ಮೂಲಕ ERα ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ (ಬೋಲ್ಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015). ಪ್ರಾಥಮಿಕ TNBC ಮಾದರಿಗಳ ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಕ್ಸೋಮ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳು UBR5 ನ ಹೆಚ್ಚಿದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದು TNBC ಯ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಅದರ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, CRISPR/Cas9-ಚಾಲಿತ UBR5 ನ ಅಳಿಸುವಿಕೆಯು TNBC ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ನ ಗಮನಾರ್ಹ ಪ್ರತಿಬಂಧ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಕಾಡು-ರೀತಿಯ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ UBR5 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದು ಅದರ ಪೂರ್ಣ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಪುನಃಸ್ಥಾಪಿಸಿತು, ಆದರೆ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಂಡ ರೂಪಾಂತರಿತ ತಳಿಗಳಲ್ಲಿ ಈ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ (ಲಿಯಾವೊ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2017). UBR5 ಕೊರತೆಯು ಹೆಚ್ಚಿದ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್, ನೆಕ್ರೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಕಳಪೆ ಆಂಜಿಯೋಜೆನೆಸಿಸ್ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ TNBC ಯಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. UBR5 ನಷ್ಟದಿಂದಾಗಿ, ದೂರದ ಅಂಗಗಳಿಗೆ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಹರಡುವಿಕೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು UBR5 ಅಸಹಜ EMT ಅನ್ನು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ E-ಕ್ಯಾಡೆರಿನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ (ಜಾಂಗ್ ಮತ್ತು ವೀನ್‌ಬರ್ಗ್, 2018). ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, E3 ಸರ್ವವ್ಯಾಪಿ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಕೊರತೆಯಿಂದಾಗಿ TNBC ಯಲ್ಲಿ IFN-γ-ಪ್ರೇರಿತ PDL1 ಪ್ರತಿಲೇಖನದಲ್ಲಿ UBR5 ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾದ ಅಂಶವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. RNA ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೋಮ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು UBR5 IFN-γ ಮಾರ್ಗಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ವ್ಯವಸ್ಥಿತ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಬೀರಬಹುದು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್ RNA (PKR) ಮತ್ತು ಅದರ ಸಿಗ್ನಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಡ್ಯೂಸರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್‌ಗಳ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ PDL1 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಆಕ್ಟಿವೇಶನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿದೆ. ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ 1 (STAT1) ಮತ್ತು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ನಿಯಂತ್ರಕ ಅಂಶ 1 (IRF1). ಆದಾಗ್ಯೂ, UBR5 ಮತ್ತು PD-L1 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಸಂಯೋಜಿತ ಅಬ್ಲೇಶನ್, ಕೇವಲ ದಿಗ್ಬಂಧನಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಸಿನರ್ಜಿಸ್ಟಿಕ್ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪರಿಸರದ ಮೇಲೆ ಆಳವಾದ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ (Wu et al., 2022). ಹೀಗಾಗಿ, CRISPR/Cas9 UBR5 ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಸಾಧನವಾಗಿರಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ TNBC ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.
ROR1 ಒಂದು ವಿಧ I ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮೆಂಬ್ರೇನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಮತ್ತು ಭ್ರೂಣದ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ಆನ್ಕೊಫೆಟಲ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಎಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ (ನಿಕೋಲಸ್ ಬೋರ್ಚೆರ್ಡಿಂಗ್, 2014). ವಿವಿಧ ಮಾನವ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳ ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ನಡವಳಿಕೆಯು ROR1 ನ ಅಪ್‌ರೆಗ್ಯುಲೇಷನ್‌ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. ROR1 ಅನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಟ್ಟುಕೊಂಡು ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡ ಇನ್ ವಿವೋ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಅಧ್ಯಯನಗಳಿಂದ ಭರವಸೆಯ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ (ಚಿಯೆನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2016). ಸ್ತನ ಅಂಗಾಂಶ ಬಯಾಪ್ಸಿಗಳಲ್ಲಿ ROR1 mRNA ಯ ಎತ್ತರದ ಮಟ್ಟಗಳು ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ಬೇಸಲ್ ತರಹದ ಸ್ತನ (BL) ಗೆಡ್ಡೆಗಳು ಮತ್ತು ದೇಹದ ಇತರ ಭಾಗಗಳಿಗೆ ಅವುಗಳ ವಲಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ROR1 ನ ಅತಿಯಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ TNBC ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಮುನ್ನರಿವಿನ ಗುರುತು ಎಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿಯೆನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2016). ಆದಾಗ್ಯೂ, TNBC ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸಲು CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ROR1 ಅನ್ನು ನಿಶ್ಯಬ್ದಗೊಳಿಸುವುದು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ.
ಸಿಯಾಲಿಲೇಷನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಗ್ಲೈಕೊಕಾಂಜುಗೇಟ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಿಯಾಲಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಸಿಯಾಲಿಲ್ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫರೇಸ್‌ಗಳು (STs) ವೇಗವರ್ಧಿಸುತ್ತವೆ. ST8SIA1 ST ಕುಟುಂಬಕ್ಕೆ ಸೇರಿದ್ದು ಮತ್ತು ಲಿಂಫೋಸೈಟಿಕ್ ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾ ಮತ್ತು ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನಂತಹ ವಿವಿಧ ರೋಗಗಳ ರೋಗಕಾರಕ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುತ್ತದೆ (ಚಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2018). RNA ಅನುಕ್ರಮ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ST8SIA1 TNBC ರೋಗಿಗಳ ಸ್ತನ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಕ್ತವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್ p53 ನಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಕಾರಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು TNBC ಯ ರೋಗಕಾರಕ ಕ್ರಿಯೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು (ಬಟ್ಟುಲಾ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2017). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ST8SIA1 TNBC ಯ ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತನೆಯಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ, ಇದು TNBC ಯ ಸಂಭವ ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. TNBC ಯ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ, CRIPSR/Cas9 ನಿಂದ ST8SIA1 ನ ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಬಟ್ಟುಲಾ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2017). TNBC ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ ST8SIA1 ಆಂಕೊಜೀನ್‌ನ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು CRISPR/Cas9 ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಸಾಧನವಾಗಿರಬಹುದು ಎಂದು ಇದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
NAT1 ಒಂದು ಚಯಾಪಚಯ ಕಿಣ್ವವಾಗಿದ್ದು, ಇದು ಹಂತ II ಕ್ಸೆನೋಬಯೋಟಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ವೇಗವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬಹುತೇಕ ಎಲ್ಲಾ ಮಾನವ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತವಾಗುತ್ತದೆ. ಆರೊಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಅಮೈನ್ ತಲಾಧಾರದ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿಯೂ ಸಹ NAT1 ಅಸಿಟೈಲ್-CoA (ಅಸಿಟೈಲ್-CoA) ಅನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸಲು ಕೊಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ ಫೋಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು (ಸ್ಟೆಪ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015; ಲೌರಿಯೇರಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2014). ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ NAT1 ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಮೆಟಾಲೊಪ್ರೋಟೀನೇಸ್ 9 (MMP9) ಕಾರ್ಯವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಹಸಿವಿನ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಆಮ್ಲಜನಕ ಪ್ರಭೇದಗಳ (ROS) ವಿರುದ್ಧ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ (ವಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2018). NAT1 ಅನ್ನು ಅಳಿಸುವುದು ಪೈರುವೇಟ್ ಡಿಹೈಡ್ರೋಜಿನೇಸ್ ಸಂಕೀರ್ಣವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಮೈಟೊಕಾಂಡ್ರಿಯಲ್ ಅಪಸಾಮಾನ್ಯ ಕ್ರಿಯೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ (ವಾಂಗ್ ಎಲ್. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳು ಮತ್ತು siRNA ನಿಶ್ಯಬ್ದಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು NAT1 ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ಆಕ್ರಮಣಶೀಲತೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಹಲವಾರು ಇತರ ವರದಿಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ (ಸ್ಟೆಪ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2018). ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶ ರೇಖೆ MDA-MB-231 ನಲ್ಲಿ NAT1 ಅನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸಲು CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು, ಇದು ಅದರ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನವು TNBC ಯ ಪ್ರಗತಿ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್‌ಗೆ NAT-1 ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ (ಕಾರ್ಲೈಲ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020).
ಆಂಕೊಜೀನ್‌ಗಳ ಸಂಯೋಜಿತ ಪ್ರತಿಲೇಖನವನ್ನು ಸೂಪರ್ ವರ್ಧಕಗಳು, ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಅಂಶಗಳು ಮತ್ತು ಸಹ-ಅಂಶಗಳು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತವೆ (ಹ್ನಿಸ್ಜ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, CDK7, CDK8, CDK9, CDK12, ಮತ್ತು CDK13 ನಂತಹ ಸೈಕ್ಲಿನ್-ಅವಲಂಬಿತ ಕೈನೇಸ್‌ಗಳ (CDK ಗಳು) ಗುಂಪು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಅವುಗಳಲ್ಲಿ, CDK7 RNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ II ನ ಫಾಸ್ಫೊರಿಲೇಷನ್‌ನಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ, ಇದು TNBC ಯ ರೋಗಕಾರಕತೆಯಲ್ಲಿ ಆಂಕೊಜೀನ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಪ್ರಾರಂಭ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಣೆಗೆ ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ. ಒಂದು ಮೂಲ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, CRISPR/Cas9 ನಿಂದ CDK7 ಅನ್ನು ಅಳಿಸುವುದು TNBC ಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು TNBC ಯ ರೋಗಕಾರಕತೆ CDK7 ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ವಾಂಗ್ ವೈ. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015).
MYC ಮತ್ತು RBP (RNA ಬಂಧಿಸುವ ಪ್ರೋಟೀನ್) ನಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಆದರೆ MYC ಅಥವಾ RBP ಯಲ್ಲಿನ ಏಕ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ (ಐನ್‌ಸ್ಟೈನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). CRISPR/Cas9-ಆಧಾರಿತ ಗ್ರಂಥಾಲಯವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಾನವ ಜೀನೋಮ್‌ನಲ್ಲಿ 1000 ಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು RBP ಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಅವುಗಳಲ್ಲಿ, 57 RBP ಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಎತ್ತರದ MYC ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವೆಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ (ವೀಲರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, TNBC ಕೋಶಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು YTHDF2 ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ MYC ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಹೊಂದಿರುವ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಉನ್ನತ ಮಟ್ಟದ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಮತ್ತು ಅನುವಾದದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮೀಥೈಲೇಟೆಡ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನಗಳ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, TNBC ರೋಗಿಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಎತ್ತರದ MYC ಮಟ್ಟಗಳ ಮೇಲೆ ಕಡಿಮೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿರುವ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳಿಗೆ YTHDF2 ಅತ್ಯಗತ್ಯವಲ್ಲ (ಐನ್‌ಸ್ಟೈನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021), ಇದು TNBC ಯನ್ನು ಜಯಿಸಬಲ್ಲ ಔಷಧಿಗಳಿಗೆ ಸಂಭಾವ್ಯ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಗುರಿಯಾಗಿರಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಸತು ಬೆರಳಿನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು (ZNF ಗಳು) ಒಟ್ಟು ಮಾನವ ಜೀನೋಮ್‌ನ ಸರಿಸುಮಾರು 1% ರಷ್ಟಿದೆ. ಯಕೃತ್ತಿನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್, ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಮತ್ತು ಕೊಲೊರೆಕ್ಟಲ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನಂತಹ ವಿವಿಧ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ZNF ಜೀವಕೋಶ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ (ಝಾಂಗ್ W. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021; Li ಮತ್ತು ಇತರರು, 2017). CRISPR ನಾಕ್‌ಔಟ್‌ನಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಗ್ರಂಥಾಲಯಗಳನ್ನು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು (TSG ಗಳು) ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ (Shalem et al., 2014). ಅಂದಿನಿಂದ, CRISPR/Cas9 ZNF319-ಅಳಿಸಿದ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಅಧ್ಯಯನವು ZNF319 ಒಂದು ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್ ಆಗಿದ್ದು ಅದು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ವಿವಿಧ ಸಂಭಾವ್ಯ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಜೈವಿಕ ಕಾರ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ (ವಾಂಗ್ L. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022).
ಫೆರೋಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಎನ್ನುವುದು ಕಬ್ಬಿಣದ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುವ ಪ್ರೋಗ್ರಾಮ್ ಮಾಡಲಾದ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿನ ಒಂದು ವಿಧವಾಗಿದೆ. ಫೆರೋಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯು ಲಿಪಿಡ್ ಪೆರಾಕ್ಸೈಡ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, PKCβII ಆರಂಭಿಕ ಲಿಪಿಡ್ ಪೆರಾಕ್ಸಿಡೀಕರಣವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿದ ಲಿಪಿಡ್ ಪೆರಾಕ್ಸಿಡೀಕರಣವು ಫೆರೋಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಕೈನೇಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳ ಲೈಬ್ರರಿಯನ್ನು ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಮಾಡಿದಾಗ PKCβII ಲಿಪಿಡ್ ಪೆರಾಕ್ಸಿಡೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ, ಇದು MDA-MB-231 ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಫೆರೋಪ್ಟೋಸಿಸ್‌ಗೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ (ಝಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022). ಆದ್ದರಿಂದ, CRISPR/Cas9 ನಿಂದ PKCβII ನ ನಾಕ್ಔಟ್ ಫೆರೋಪ್ಟೋಸಿಸ್-ಸಂಬಂಧಿತ ಕಾಯಿಲೆಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಸಂಭಾವ್ಯ ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್ ಗುರಿಯಾಗಿರಬಹುದು ಎಂದು ಇದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಝಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022).
ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಸರಿಸುಮಾರು 90% ಸಾವುಗಳಿಗೆ ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧವು ಕಾರಣವಾಗಿದೆ ಎಂದು ನಂಬಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಇದು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿನ ಪ್ರಮುಖ ಸವಾಲುಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ (ಬುಕೊವ್ಸ್ಕಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). ಔಷಧದ ಹೊರಹರಿವು, ಡಿಎನ್‌ಎ ದುರಸ್ತಿ, ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಕೋಶ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಮಾರ್ಗಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಸಾಕಷ್ಟು ಸಂಖ್ಯೆಯ ಜೀನ್‌ಗಳು ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಹೈದರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). ಅವುಗಳಲ್ಲಿ, ಹಲವಾರು ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು CRISPR/Cas9 ಉಪಕರಣಗಳು ಗುರಿಯಾಗಿರಿಸಿಕೊಂಡಿವೆ ಮತ್ತು ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವಲ್ಲಿ ಭರವಸೆಯ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ (ವಾಘರಿ-ತಬರಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ-ಥ್ರೂಪುಟ್ CRISPR/Cas9 ಜೀನ್ ನಾಕ್‌ಔಟ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಲೈಬ್ರರಿಗಳು ಸಂಭಾವ್ಯ ಔಷಧ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್ ಗುರಿಗಳ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವಲ್ಲಿ ಭಾಗಿಯಾಗಿವೆ (ಶಾಲೆಮ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015). ಪ್ಯಾಕ್ಲಿಟಾಕ್ಸೆಲ್ ಪ್ರತಿರೋಧ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು, ಜೀನೋಮ್-ವೈಡ್ sgRNA ಲೈಬ್ರರಿ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್‌ನೊಂದಿಗೆ RNA ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಎಂಟು ಅಭ್ಯರ್ಥಿ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಯಿತು, ಇದರಲ್ಲಿ ಹಿಸ್ಟೋನ್ ಡೀಅಸಿಟೈಲೇಸ್ 9 (HDAC9) ಸೇರಿವೆ, ಇವು ಪುನರಾವರ್ತಿತ TNBC ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧದೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿವೆ (B et al., 2020). ಮತ್ತೊಂದು ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಔಷಧಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ TNBC ರೋಗಿಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಡೈಸೆರಿನ್/ಥ್ರೆಯೋನೈನ್ ಮತ್ತು ಟೈರೋಸಿನ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕೈನೇಸ್ (DSTYK) ನ ಹೆಚ್ಚಿದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, DSTYK ಯ CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ (SUM102PT ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು MDA-MB-468 ಜೀವಕೋಶಗಳು) ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿವೋ TNBC ಮಾದರಿ (Ogbu et al., 2021) ಔಷಧ-ನಿರೋಧಕ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ಅಪೊಪ್ಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿದೆ.
TNBC MAPK ಮಾರ್ಗದ ಅಸಹಜ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೂ, MEK-ಉದ್ದೇಶಿತ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳ ವೈದ್ಯಕೀಯ ಪರಿಣಾಮವು ಕಳಪೆಯಾಗಿದೆ. CRISPR/Cas9 ಜೀನೋಮಿಕ್ ಲೈಬ್ರರಿ ಪರದೆಯು PSMG2 (ಪ್ರೋಟಿಯೋಮ್ ಅಸೆಂಬ್ಲಿ ಚಾಪೆರೋನ್ 2) ನ ಪ್ರತಿಬಂಧವು TNBC BT549 ಮತ್ತು MB468 ಕೋಶಗಳನ್ನು MEK ಪ್ರತಿರೋಧಕ AZD6244 ಗೆ ಸಂವೇದನಾಶೀಲಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿದೆ. PSMG2 ನ CRISPR/Cas9 ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರೋಟಿಯೋಸೋಮ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿತು, ಇದು PDPK1 ನ ಆಟೋಫ್ಯಾಜಿ-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಡಿಸ್ಅಸೆಂಬಲ್‌ಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಇದರಿಂದಾಗಿ AZD6244 (MEK ಪ್ರತಿರೋಧಕ) ಮತ್ತು MG132 (ಪ್ರೋಟಿಯೋಸೋಮ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕ) ನಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ TNBC ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ. ಹೀಗಾಗಿ, ಗೆಡ್ಡೆ ಕೋಶ ಪ್ರಸರಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಪ್ರೋಟಿಯೋಸೋಮ್ ಮತ್ತು MAP ಕೈನೇಸ್ (MEK) ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳನ್ನು ಸಿನರ್ಜಿಸ್ಟಿಕ್ ಆಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು (ವಾಂಗ್ X. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022).
TNBC ಪ್ರತಿರೋಧಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುವ ಜೀನ್ ಕಾರ್ಯದ ನಷ್ಟವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಶು ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). Ge ಮತ್ತು ಇತರರು TNBC ಯಲ್ಲಿ BET ಬ್ರೋಮೊಡೊಮೈನ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕ (BBDI) JQ1 ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ವಿವರಿಸಿದರು. CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, rb1 ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಅಳಿಸುವುದರಿಂದ TNBC ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಔಷಧ JQ1 ಗೆ ನಿರೋಧಕವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅವರು ಕಂಡುಕೊಂಡರು. ಆದ್ದರಿಂದ, TNBC ಯಲ್ಲಿ JQ1 ಔಷಧಿಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ rb1 ಕಾರ್ಯವು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ. ಪ್ಯಾಕ್ಲಿಟಾಕ್ಸೆಲ್ CDK4/6 ಕೈನೇಸ್/ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು JQ1 ನಂತಹ BBDI ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅದರ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಔಷಧ-ನಿರೋಧಕ TNBC ಗೆ ಭರವಸೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಅವರು ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದಾರೆ (Ge ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020).
TNBC ಯಲ್ಲಿ ನಿಯೋಅಡ್ಜುವಂಟ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧಕ್ಕೆ ಲಾಂಗ್ ನಾನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ RNA (lncRNA) ನ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನಲ್ ಲ್ಯಾಂಡ್‌ಸ್ಕೇಪ್ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನವು ಐದು ವಿಭಿನ್ನ MALAT1 lncRNA ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್‌ಗಳು TNBC ಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಕ್ತವಾಗುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, MALAT1 ನ CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಅಳಿಸುವಿಕೆಯು TNBC BT-549 ಕೋಶಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಪ್ಯಾಕ್ಲಿಟಾಕ್ಸೆಲ್ ಮತ್ತು ಡಾಕ್ಸೊರುಬಿಸಿನ್‌ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು, ಇದು TNBC ಯಲ್ಲಿ MALAT1 ಪ್ರತಿರೋಧಕ್ಕೆ ಸಂಭಾವ್ಯ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಶಾತ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021).
BRCA1 (BRCA1m) ನಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳು ವೈವಿಧ್ಯಮಯವಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವುದು ಕಷ್ಟ. BRCA1 ನ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಮಾರಕ ಪಾಲುದಾರ PARP1 (ಪಾಲಿ (ADP-ರೈಬೋಸ್) ಪಾಲಿಮರೇಸ್) ಅನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಟ್ಟುಕೊಂಡು, TNBC ಔಷಧದ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಂವೇದನೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು. CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, PARP1 ಅನ್ನು ಅಳಿಸುವುದರಿಂದ mBRCA1 ರೂಪಾಂತರಿತ TNBC ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಡಾಕ್ಸೊರುಬಿಸಿನ್, ಜೆಮ್ಸಿಟಾಬೈನ್ ಮತ್ತು ಡೋಸೆಟಾಕ್ಸೆಲ್‌ನಂತಹ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಔಷಧಿಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಯಿತು, ಇದು PARP1 TNBC ಯಲ್ಲಿ ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧದಲ್ಲಿಯೂ ತೊಡಗಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ವಾಘರಿ-ತಬರಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022). . ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್‌ಗಳಾದ BRCA1 ಅಥವಾ BRCA2 ನಲ್ಲಿನ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಜನರಲ್ಲಿ ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಬರುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ. ಈ ರೋಗಿಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ PARP ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳ ಬಳಕೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, CRISPR/Cas9 ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಸಾಲ್ವೇಜ್ ಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ DNPH1 ಅನ್ನು ನಾಕ್ಔಟ್ ಮಾಡುವುದರಿಂದ ವಿಷಕಾರಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ 5-ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿಮೀಥೈಲ್ಡಿಯೋಕ್ಸಿಯುರಿಡಿನ್ (hmdU) ಮೊನೊಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ PARP ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗೆ (Fugger) ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಗೆ BRCA- ಕೊರತೆಯಿರುವ ಕೋಶಗಳ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಹೀಗಾಗಿ, CRISPR/Cas9 ಮತ್ತು PARP1 ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳು TNBC ಗೆ ಪ್ರಮುಖ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ತಂತ್ರವಾಗಬಹುದು.
ಪೆನೆಟ್ರಾಂಟ್ ಗ್ಲೈಕೊಪ್ರೋಟೀನ್ (P-gp) ಜೀನ್ ಬಹುಔಷಧ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಎಲ್ಲಾ TNBC ಗಳಲ್ಲಿ ಸರಿಸುಮಾರು 41% ರಷ್ಟು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಸನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). P-gp-ಪ್ರೇರಿತ ಔಷಧ ಹೊರಹರಿವು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನಲ್ಲಿ ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧದ ಪ್ರಮುಖ ನಿಯಂತ್ರಕವೆಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ. P-gp ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಔಷಧಿಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿದ ಸಂವೇದನೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿವೆ (Famta ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಹೀಗಾಗಿ, CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಅಬ್ಲೇಶನ್ ಅಥವಾ P-gp ಮತ್ತು P-gp ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳ ನಿಗ್ರಹವು TNBC ಯಲ್ಲಿ ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ನಿವಾರಿಸಲು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾದ ವಿಧಾನಗಳಾಗಿರಬಹುದು.
ATP-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಕ್ಯಾಸೆಟ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಪೋರ್ಟರ್ G2 (ABCG2) TNBC ಯಲ್ಲಿ ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ (Palasuberniam et al., 2015), ಆದಾಗ್ಯೂ CRISPR/Cas9 ಮತ್ತು ABCG2 ಸೈಲೆನ್ಸಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಟ್ಯೂಮರ್ ಸಪ್ರೆಸರ್ ಜೀನ್ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧದ ಬಗ್ಗೆ ಪ್ರಸ್ತುತ ಯಾವುದೇ ವರದಿಗಳಿಲ್ಲ. PTEN ABCG2 ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು (Palasuberniam et al., 2015), (ದೀಪಕ್ ಸಿಂಗ್ et al., 2021). ಆದ್ದರಿಂದ, ABCG2 ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು CRISP/Ca9 ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ABCG2 ಪ್ರತಿರೋಧಕದೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುವುದು TNBC ಯಲ್ಲಿ ಔಷಧ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ನಿವಾರಿಸಲು ಸೂಕ್ತವಾದ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಾಗಿದೆ. ಕೋಷ್ಟಕ 2 ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರತಿರೋಧ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸಿಕೊಂಡು CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಉಲ್ಲೇಖಿಸುತ್ತದೆ.
ಕೋಷ್ಟಕ 2. CRISPR/Cas9 ವಿವಿಧ TNBC ಪ್ರತಿರೋಧ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಔಷಧಿಗಳಿಗೆ ಸಂವೇದನಾಶೀಲಗೊಳಿಸಲು ಗುರಿಯಾಗಿಸುತ್ತದೆ.
CRISPR/Cas9 ಗ್ರಂಥಾಲಯಗಳು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ರೋಗಕಾರಕತೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಸಂಭಾವ್ಯ ಸಾಧನಗಳಾಗಿವೆ (ಚಾನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022). ಈ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ವಿಧಾನವು (ಎ) ಗ್ರಂಥಾಲಯ ನಿರ್ಮಾಣ, (ಬಿ) ಲೆಂಟಿವೈರಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಡಕ್ಷನ್, (ಸಿ) ಫಿನೋಟೈಪಿಕ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಮತ್ತು (ಡಿ) ಗುರಿ ಜೀನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಂತಹ ನಾಲ್ಕು ಹಂತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. TNBC MAPK ಮಾರ್ಗದ ಅಸಹಜ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೂ, PTEN, RB1, ಮತ್ತು TP53 ನಂತಹ ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕ ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ TNBC ರೋಗಿಗಳಿಗೆ MEK ಗುರಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ವೈದ್ಯಕೀಯ ಮುನ್ನರಿವು ತುಂಬಾ ಕಳಪೆಯಾಗಿದೆ.
ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಒಂದು ಜೀನ್ ನಾಕ್ಔಟ್ ಸ್ಕ್ರೀನ್, MDA-MB-231 ಮೇಲೆ ಡಿಹೈಡ್ರೋಕ್ಯಾಟ್ರೋಲ್‌ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು, ಗ್ವಾಟೆಮಾಲನ್ ಹೂವು ಮತ್ತು ಎಲೆ ಸಾರಗಳಲ್ಲಿ ಹೇರಳವಾಗಿರುವ ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಬಲ ಮತ್ತು ಆಯ್ದ ಅಣುವಾದ ಡಿಹೈಡ್ರೋಕ್ಯಾಟ್ರೋಲ್ ಅನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿತು. ಆಯ್ದ ಕೋಶ ಸೈಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಯ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು. TNBC ಉಪವಿಭಾಗಗಳ ಮೆಸೆಂಕಿಮಲ್ ಕಾಂಡದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು. ಈ CRISPR/Cas9-ಆಧಾರಿತ ಸ್ಕ್ರೀನ್, 17β-ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿಸ್ಟರಾಯ್ಡ್ ಡಿಹೈಡ್ರೋಜಿನೇಸ್ ಟೈಪ್ 11 ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಜೀನ್ HSD17B11, MDA-MB-231 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಕ್ತವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು MDA-MB-231 ಕೋಶಗಳಿಗೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾದ ಡಿಹೈಡ್ರೋಫಾಲ್ಕರಿನಾಲ್ ಅನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿದೆ (ಗ್ರಾಂಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). ಹೀಗಾಗಿ, ಸಂಭಾವ್ಯ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ಆಧಾರವಾಗಿರುವ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸುವಲ್ಲಿ CRISPR/Cas9 ಜೀನೋಮಿಕ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ಇದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, TNBC ಯ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗೆ ಒಳಗಾಗುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಪಕ್ಷಪಾತವಿಲ್ಲದ ಜೀನೋಮ್-ವೈಡ್ ಇನ್ ವಿವೋ CRISPR/Cas9 ಪರದೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಇದು ಆಂಕೊಜೆನಿಕ್ ಮತ್ತು ಗೆಡ್ಡೆ ನಿರೋಧಕ ಮಾರ್ಗಗಳ ನಡುವಿನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ. mTOR ಮತ್ತು ಹಿಪ್ಪೋ ಮಾರ್ಗಗಳ ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶಗಳು TNBC ಯಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, mTORC1/2 ಮತ್ತು YAP ಆಂಕೊಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಔಷಧೀಯ ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಡ್ರಗ್-ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಸಿನರ್ಜಿ ಮಾದರಿ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿವೊ ರೋಗಿಯಿಂದ ಪಡೆದ ಕ್ಸೆನೋಗ್ರಾಫ್ಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು TNBC ಯ ರೋಗಕಾರಕತೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಟೋರಿನ್-1-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ mTORC1/2 ಪ್ರತಿಬಂಧವು ಮ್ಯಾಕ್ರೋಪಿನೋಸೈಟೋಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ವರ್ಟೆಪೋರ್ಫಿನ್-ಪ್ರೇರಿತ YAP ಪ್ರತಿಬಂಧವು TNBC ಜೀವಕೋಶದ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ. ಒಟ್ಟಿಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡರೆ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು TNBC ಗಾಗಿ ನವೀನ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಜೀನೋಮ್-ವೈಡ್ ಇನ್ ವಿವೋ CRISPR ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್‌ನ ಶಕ್ತಿ ಮತ್ತು ದೃಢತೆಯನ್ನು ಎತ್ತಿ ತೋರಿಸುತ್ತವೆ (ಡೈ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021).
ಟ್ಯೂಮರಿಜೆನೆಸಿಸ್‌ನಲ್ಲಿ ರೋಗನಿರೋಧಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಅನಿಯಂತ್ರಣವು ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶವಾಗಿದೆ. ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳು ರಕ್ಷಣಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬೈಪಾಸ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ರೋಗನಿರೋಧಕ ತೆರವುಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುತ್ತವೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪರಿಸರದಲ್ಲಿ ರೋಗನಿರೋಧಕ ಕೋಶಗಳ ಚಟುವಟಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ರಾಜಿ ಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು ಸೇರಿವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಸುಧಾರಿತ ರೋಗನಿರೋಧಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವುದು ಗೆಡ್ಡೆಗಳ ವಿರುದ್ಧ ಹೋರಾಡಲು ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ವಿಧಾನವಾಗಿರಬಹುದು. CRISPR/Cas9-ಆಧಾರಿತ ಜೀನ್ ಮಾರ್ಪಾಡಿನ ಬಳಕೆಯು ವಿಭಿನ್ನ ದೃಷ್ಟಿಕೋನಗಳಿಂದ ರೋಗನಿರೋಧಕ ಅಪಸಾಮಾನ್ಯ ಕ್ರಿಯೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಹಲವಾರು ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸುತ್ತದೆ. ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರುದ್ಧ ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ರೋಗನಿರೋಧಕ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಮಾರ್ಗಗಳ ಮೂಲಕ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 3).
ಚಿತ್ರ 3. CRISPR/Cas9 ಇಮ್ಯುನೊಥೆರಪಿ TNBC ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುತ್ತದೆ. CDK5 ನಷ್ಟ ಮತ್ತು PDL1 ಮತ್ತು CD155 ನ ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ. ಅಂತೆಯೇ, A2AR ನಷ್ಟ ಮತ್ತು HER2, ಮ್ಯೂಸಿನ್ 1 ಮತ್ತು TEM8 ನಂತಹ TAA ಗಳ ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕೊಲ್ಲುವಲ್ಲಿ CAR-T ಕೋಶಗಳ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು. CRISPR/Cas9-ಚಾಲಿತ ಟಿ ಕೋಶ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ p38 ಕೈನೇಸ್‌ನ ಅಡ್ಡಿ T ಕೋಶ ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. CRISPR/Cas9 ನಿಂದ ಮಾರ್ಪಡಿಸಲಾದ ಟಿ ಕೋಶಗಳು TCR (T ಕೋಶ ಗ್ರಾಹಕ) ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತವೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಟಿ ಕೋಶಗಳು ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.
ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ಮೇಲೆ ದಾಳಿ ಮಾಡಲು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವುದು ಇಮ್ಯುನೊಥೆರಪಿಯ ಗುರಿಯಾಗಿದೆ. ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಚೆಕ್‌ಪಾಯಿಂಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಅತಿಯಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸ್ವಯಂ ನಿರೋಧಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ ಆದರೆ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳು ಅವುಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡಬಹುದು (ಟೋಪಾಲಿಯನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2015). ಈ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಕೋಶಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿರುವ ಗ್ರಾಹಕಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತವೆ. ಬಹು ಚೆಕ್‌ಪಾಯಿಂಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು (CD155 ಮತ್ತು PD-L1 ನಂತಹವು) ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಕೋಶಗಳ ಮೇಲೆ PD-1 ಗ್ರಾಹಕವನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನಲ್ಲಿ ವ್ಯಕ್ತವಾಗುತ್ತವೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ TNBC (Li Y.-C. ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). CRISPR/Cas9 ಬಳಸಿಕೊಂಡು PD-L1 ಅಥವಾ ಅದರ ಗ್ರಾಹಕವನ್ನು ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಮಾಡುವುದರಿಂದ TNBC ಗೆಡ್ಡೆಗಳ ಮೇಲೆ ದಾಳಿ ಮಾಡಲು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ (ಯಹತಾ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, CDK5 ನ CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಅಳಿಸುವಿಕೆಯ ಮೂಲಕ PD-L1 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಕಡಿಮೆ ನಿಯಂತ್ರಣವು ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿವೊದಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ (ಡೆಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020). ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಮತ್ತು ಇನ್ ವಿವೊ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿನ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧವು CD155 ನ shRNA- ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಕಡಿತವು ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಮೇಲೆ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಗಾವೊ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2018).
CAR T ಕೋಶಗಳು ಗೆಡ್ಡೆ-ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರತಿಜನಕಗಳನ್ನು (TAAs) ಗುರುತಿಸುವ CAR ಗಳನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಚೆಕ್‌ಪಾಯಿಂಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು (Li C. et al., 2020). ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನಲ್ಲಿ CAR T ಕೋಶ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ HER2, mucin1, ಮತ್ತು TEM8 ನಂತಹ ಹಲವಾರು TAA ಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ವಿವಿಧ ಸಂಭಾವ್ಯ ಗುರಿಗಳಿವೆ (Bajgain et al., 2018). CRISPR/Cas9 (Hu et al., 2019) ಬಳಸಿ PD-1 ಅನ್ನು ನಾಕ್ಔಟ್ ಮಾಡಿದಾಗ ಮೆಸೊಥೆಲಿನ್ (TNBC BT-459 ಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಅತಿಯಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ) ಅನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುವ CAR T ಕೋಶಗಳು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರುದ್ಧ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಎಂಬುದಕ್ಕೆ ಪುರಾವೆಗಳಿವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ರೋಗಿಗಳಿಂದ T ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುವುದು ಮತ್ತು ನಂತರ ಅವುಗಳನ್ನು ಎಕ್ಸ್ ವಿವೋದಲ್ಲಿ ಸಂಪಾದಿಸುವುದು ಶ್ರಮದಾಯಕ ಮತ್ತು ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದೆ. ಸಾರ್ವತ್ರಿಕ T ಕೋಶಗಳು ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದಾದರೂ, ಕಸಿ-ವರ್ಸಸ್-ಹೋಸ್ಟ್ ಅಸಹಜತೆಗಳನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಮಾನವ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಪ್ರತಿಜನಕ (HLA) ವರ್ಗ I ಮತ್ತು T ಕೋಶ ಗ್ರಾಹಕ (TCR) ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುವ ದಾನಿ T ಕೋಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬೇಕು (ರೆನ್ et al., 2017). , 2017a). CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, HDR ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ TCR ಮತ್ತು HLA ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು ಮತ್ತು CAR ಅನ್ನು ಎನ್ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ನಾಕ್ಔಟ್ ಮಾಡಬಹುದು. CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು TCR ಲೋಕಸ್‌ಗೆ ಆಂಟಿ-CD19 CAR ಗಳನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ T ಕೋಶಗಳನ್ನು ಖಾಲಿ ಮಾಡದೆ CAR ಗಳನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಉತ್ಪಾದಿಸಬಹುದು (ಡಿಮಿಟ್ರಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022). TCR, ಬೀಟಾ-2-ಮೈಕ್ರೋಗ್ಲೋಬ್ಯುಲಿನ್ (B2M), HLA-I ಉಪಘಟಕ ಮತ್ತು PD-1 ಮತ್ತು CTLA-4 ನಂತಹ ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಮೂಲಕ ಅಲೋಜೆನಿಕ್ CAR T ಕೋಶಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರಬಹುದು. TNBC ವಿರುದ್ಧ (ಐಕ್ವೆಮ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2017; ಲಿಯು ಮತ್ತು ಇತರರು, 2017; ರೆನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2017b; ಡಿಮಿಟ್ರಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2022).
CRISPR/Cas9 ಬಳಸುವುದರಿಂದ CAR-T ಕೋಶಗಳ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು. ಅಡೆನೊಸಿನ್ ರೋಗನಿರೋಧಕ ಶಮನಕಾರಿ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ ಮತ್ತು T ಕೋಶ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಅಡೆನೊಸಿನ್ A2A ಗ್ರಾಹಕಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ರೋಗನಿರೋಧಕ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ (A2AR) (ವಿಗಾನೊ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). CRISPR/Cas9 ಬಳಸಿ A2AR ಅನ್ನು ನಿಶ್ಯಬ್ದಗೊಳಿಸುವುದರಿಂದ CAR-T ಕೋಶಗಳ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವು ವಿವೋದಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸಿತು (ಗಿಯುಫ್ರಿಡಾ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಟಿ ಕೋಶಗಳು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ವಿಸ್ತರಣೆ, ವ್ಯತ್ಯಾಸ, ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು ಜೀನೋಮಿಕ್ ಒತ್ತಡದಂತಹ ವಿವಿಧ ಫಿನೋಟೈಪಿಕ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ. CRISPR/Cas9-ಆಧಾರಿತ ಟಿ ಕೋಶ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ 25 ವಿಭಿನ್ನ ಟಿ ಕೋಶ ಗ್ರಾಹಕ ಕೈನೇಸ್‌ಗಳ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು. ಅವುಗಳಲ್ಲಿ, p38 ಕೈನೇಸ್ ಅನ್ನು ಅಳಿಸುವುದು T ಕೋಶಗಳ ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ, p38 ಕೈನೇಸ್ CAR-T ಕೋಶ ನಿಯಂತ್ರಣದ ಪ್ರಮುಖ ನಿಯಂತ್ರಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ (ಗುರುಸಾಮಿ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020).
CRISPR/Cas9 ಬಳಸಿ T ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಆನುವಂಶಿಕವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ TCR ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಬಹುದು. ತಳೀಯವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ T ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ರೋಗಿಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸುವುದು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ T ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗಿಂತ ಬಲವಾದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ TCR ಗಳು ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ತಳೀಯವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ TCR ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಪರ್ಧಿಸಬಹುದು, ಇದು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಇಮ್ಯುನೊಥೆರಪಿಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಬಹುದು. ಈ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ನಿವಾರಿಸಲು, ಸ್ವೀಕರಿಸುವ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ TCR-β ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಮತ್ತು ತರುವಾಯ TCR-β T ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ರೋಗಿಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲು CRISPR/Cas9 ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದರಿಂದ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ TCR ಲೈಂಗಿಕ ಸ್ಪರ್ಧೆಯ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೆ ಉತ್ತಮ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ವಿರೋಧಿ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಬಹುದು (Fan et al. 2018). ಹೀಗಾಗಿ, CRISPR-ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ T ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ, TCR ಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯ TCR-ಟ್ರಾನ್ಸ್ಡ್ಯೂಸ್ಡ್ T ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗಿಂತ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಪ್ರತಿಜನಕಗಳಿಗೆ ಸಾವಿರ ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾಗಿರುತ್ತವೆ. ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ವಿವಿಧ ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾಗಳಲ್ಲಿ, γδ TCR+ CRISPR ನಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಬದಲಾದ T ಜೀವಕೋಶಗಳು ಪ್ರಮಾಣಿತ TCR ವರ್ಗಾವಣೆಗಿಂತ CD4+ ಮತ್ತು CD8+ T ಜೀವಕೋಶಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ (Legut et al., 2018). ಹೀಗಾಗಿ, CRISPR/Cas9 ನಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ T ಕೋಶಗಳು TNBC ಯನ್ನು ನಿವಾರಿಸಲು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಇಮ್ಯುನೊಥೆರಪಿ ವಿಧಾನವಾಗಿರಬಹುದು.
ಇಂಟಿಗ್ರಿನ್‌ಗಳು ಜೀವಕೋಶದ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಮೆಂಬ್ರೇನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಇರುವ ಜೀವಕೋಶ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಅಣುಗಳಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್‌ಗೆ (ECM) ಬಂಧಿಸುವುದನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತವೆ (ಹಮಿಡಿ ಮತ್ತು ಇವಾಸ್ಕಾ, 2018). ಇಂಟಿಗ್ರಿನ್‌ಗಳ ಅನಿಯಂತ್ರಣವು ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಬೆಳವಣಿಗೆ ಮತ್ತು ವಲಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ, ಇದು ರಕ್ತಪರಿಚಲನೆಯಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ (ಹಮಿಡಿ ಮತ್ತು ಇವಾಸ್ಕಾ, 2018). CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಇಂಟೆಗ್ರಿನ್ ನಾಕ್‌ಡೌನ್ TNBC ಯಲ್ಲಿ ಗೆಡ್ಡೆಯ ಪ್ರಗತಿ, ಮೆಟಾಸ್ಟಾಸಿಸ್ ಮತ್ತು ವಸಾಹತುಶಾಹಿಯನ್ನು ನಿಧಾನಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಇಂಟಿಗ್ರಿನ್ a5 (ITGA5) ನ ನಾಕ್‌ಡೌನ್ ಶ್ವಾಸಕೋಶದ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ನಂತಹ ಇತರ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶ ವಲಸೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ವರದಿಯಾಗಿದೆ (ಜು ಮತ್ತು ಇತರರು, 2017), ಇದು TNBC ಯ ರೋಗಕಾರಕ ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಇಂಟಿಗ್ರಿನ್ a5 ಸಹ ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶವಾಗಿರಬಹುದು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಭ್ರೂಣ ಕಾಂಡ (ES) ಕೋಶ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಾಕ್ಔಟ್ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವುದು ಶ್ರಮದಾಯಕ, ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವ ಮತ್ತು ಅದಕ್ಷ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದೆ. ಹೋಮೋಲೋಗಸ್ ಮರುಸಂಯೋಜನೆಯ ಮೂಲಕ ES ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸಲು, ಚಿಮೆರಿಕ್ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಮಾಡಲು ಮತ್ತು ನಂತರ ಅವುಗಳನ್ನು ಹೆಟೆರೊಜೈಗಸ್ ಇಲಿಗಳೊಂದಿಗೆ ದಾಟಿ ಹೋಮೋಜೈಗಸ್ ಸಂತತಿಯನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ತಿಂಗಳುಗಳು ಮತ್ತು ವರ್ಷಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಬಹು ಆನುವಂಶಿಕ ರೂಪಾಂತರಗಳೊಂದಿಗೆ ಇಲಿಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಸಂಕೀರ್ಣ ಅಡ್ಡ-ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, CRISPR/Cas9 ಬಳಸಿಕೊಂಡು ES ಕೋಶಗಳ ಅಬ್ಲೇಶನ್ ಮೂಲಕ ಅಥವಾ CRISPR/Cas9 ಘಟಕಗಳನ್ನು ಏಕ-ಕೋಶ ಫಲವತ್ತಾದ ಮೊಟ್ಟೆಗಳಾಗಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಇಂಜೆಕ್ಟ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ ಅನೇಕ ಸಮಸ್ಯೆಗಳು ಉದ್ಭವಿಸಿವೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಬದಲಾವಣೆಗಳ ಪರಿಚಯವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬೈಯಾಲೆಲಿಕ್ ಲೊಕಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದು ಜೀನ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿಲ್ಲ. CRISPR/Cas9 ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸುವ ES ಕೋಶಗಳು ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ 5 ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಬೈಯಾಲೆಲಿಕ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ವರದಿಯಾಗಿದೆ (ನಿಶಿಜೋನೊ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). ಈ ಉದ್ದೇಶಕ್ಕಾಗಿ, Cas9 mRNA ಮತ್ತು ಐದು ಜೀನ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ gRNA ಗಳನ್ನು ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ES ಕೋಶಗಳಿಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು. ಇದು ಈ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಭರವಸೆ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವನ್ನು ಎತ್ತಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಆದಾಗ್ಯೂ ಈ ರೂಪಾಂತರಗಳು ಐದನೇ ನಾಕ್ಔಟ್ ಇಲಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಸ್ಥಾಪಕ ರೇಖೆಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸಿದಾಗ ರವಾನಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರಬಹುದು. ಅಧ್ಯಯನವು ಆಶ್ಚರ್ಯಕರ ಆವಿಷ್ಕಾರವನ್ನು ಸಹ ವರದಿ ಮಾಡಿದೆ: ES ಕೋಶಗಳು ಇನ್ನು ಮುಂದೆ ತಳೀಯವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಇಲಿಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ. ಬದಲಾಗಿ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಜೀನ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು, Cas9 mRNA ಮತ್ತು gRNA ಅನ್ನು ಏಕ-ಕೋಶ ಹಂತದ ಭ್ರೂಣಗಳಿಗೆ ಚುಚ್ಚಲಾಯಿತು. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಇಲಿಗಳಲ್ಲಿ ಜೀನ್ ಅಳಿಸುವಿಕೆಯ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದಾದ ನಾಕ್ಔಟ್ ಸ್ಥಾಪಕ ರೇಖೆಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ (ಕ್ವಿನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2016). ಹೀಗಾಗಿ, CRISPR/Cas9 ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಜೆನೆಟಿಕ್ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್‌ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ವೆಚ್ಚದಲ್ಲಿ TNBC ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲು ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಜೆನಿಕ್ ಇಲಿಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ. CRISPR/Cas ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, TNBC ಯಲ್ಲಿ ಒಂದು ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪಾಯಿಂಟ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿ ಪರಿಚಯಿಸಬಹುದಾದ ಹೊಸ ನಾಕ್ಔಟ್ ಮೌಸ್ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಈ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, TNBC ಯ ಪ್ರಾಣಿ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು BRCA1 ಮತ್ತು p53 ನ CRISPR/Cas9-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಅಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಬಹುದು, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ HR ದುರಸ್ತಿ, ಜೀನೋಮಿಕ್ ಅಸ್ಥಿರತೆ ಮತ್ತು ರೂಪಾಂತರಿತ ಫಿನೋಟೈಪ್‌ಗಳ ನಷ್ಟವಾಗುತ್ತದೆ (ಅನ್ನುಂಜಿಯಾಟೊ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2020).
ಪ್ರಸ್ತುತ, ಮ್ಯಾಮೊಗ್ರಫಿ, ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ರೆಸೋನೆನ್ಸ್ ಇಮೇಜಿಂಗ್ (MRI) ಮತ್ತು ಅಲ್ಟ್ರಾಸೌಂಡ್‌ನಂತಹ ವಿವಿಧ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು TNBC ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಮಾಡಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ವಿಧಾನಗಳು ಕೆಲವು ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ. ಮೆಟಾಸ್ಟೇಸ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಸ್ಥಳೀಯ ಸ್ತನ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಮ್ಯಾಮೊಗ್ರಫಿಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಲ್ಲಿ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳು ಇತರ ಅಂಗಗಳಿಗೆ ವಲಸೆ ಹೋಗಿವೆ. ಅಲ್ಟ್ರಾಸೊನೋಗ್ರಫಿ TNBC ರೋಗನಿರ್ಣಯಕ್ಕೆ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ವಿಧಾನವಲ್ಲ (ಚೆನ್ ಮತ್ತು ಲೀ-ಫೆಲ್ಕರ್, 2023). MRI ಅಲ್ಟ್ರಾಸೌಂಡ್ ಮತ್ತು ಮ್ಯಾಮೊಗ್ರಫಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ ಅದರ ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ನಿಖರತೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ (ಶಾ ಮತ್ತು ಚೆನ್, 2022). ಅಂಗಾಂಶ ಬಯಾಪ್ಸಿ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಒಂದು ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ಮಾರ್ಗವಾಗಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕೆಲವು ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ, ಸೂಜಿ ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ ದೂರ ಹೋದರೆ ಬಯಾಪ್ಸಿ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬಹುದು. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಇದು ತುಂಬಾ ದುಬಾರಿಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ರೋಗಿಗೆ ಆಘಾತಕಾರಿಯಾಗಬಹುದು. TNBC ಒಂದು ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ರೀತಿಯ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಆಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಬಯಾಪ್ಸಿ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಪ್ರಕಾರದ ಬಗ್ಗೆ ಸಾಕಷ್ಟು ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸದಿರಬಹುದು. ಆದ್ದರಿಂದ, TNBC ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಹೊಸ ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ವಿಧಾನವು ತುರ್ತಾಗಿ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. CRISPR/Cas9 ಸ್ತನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ರೋಗನಿರ್ಣಯಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಮತ್ತು ಕನಿಷ್ಠ ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು. ಈ ನಿಟ್ಟಿನಲ್ಲಿ, TNBC ರೋಗನಿರ್ಣಯಕ್ಕಾಗಿ PCR ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು CRISPR/Cas9-ಆಧಾರಿತ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, CRISPR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ Cas9 ಮತ್ತು cpf1 ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ DNA ಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ನಂತರ ಈ ಎರಡು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು (Cas9 ಮತ್ತು cpf1) ಗುರಿ DNA ಗೆ ಬಂಧಿಸುವ ಮೊದಲು PAM ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಗುರುತಿಸಬಹುದು (ದೀಪಕ್ ಸಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2021). . ಹೀಗಾಗಿ, PCR ಕ್ಯಾನ್ಸರ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಬಹುದು. ವಿಭಿನ್ನ ಕ್ಯಾನ್ಸರ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಹಲವಾರು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಈ CRISPR-ಆಧಾರಿತ ತಂತ್ರವನ್ನು ಅಳವಡಿಸಿಕೊಂಡಿವೆ (Safari et al., 2019). ಹೀಗಾಗಿ, CRISPR-ಆಧಾರಿತ PCR ವಿಧಾನಗಳು ಬಯಾಪ್ಸಿ-ಆಧಾರಿತ ಇಮ್ಯುನೊಹಿಸ್ಟೋಕೆಮಿಸ್ಟ್ರಿಯಂತಹ ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ವಿಧಾನಗಳ ಮೇಲೆ TNBC ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ಅವಲಂಬನೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು.
ಹಾರ್ಮೋನ್ ಗ್ರಾಹಕ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿನ ಜೀನೋಟೈಪಿಕ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು TNBC ಯಲ್ಲಿಯೂ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚೆನ್ ಮತ್ತು ರುಸ್ಸೋ, 2009). ಪಾಯಿಂಟ್-ಆಫ್-ಕೇರ್ ಡಯಾಗ್ನೋಸ್ಟಿಕ್ಸ್‌ಗಾಗಿ ಮೈಕ್ರೋಅರೇಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ CRISPR/Cas9-ಆಧಾರಿತ PCR ತಂತ್ರಗಳು ಈ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಬಹುದು (ಹಜಿಯಾನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019). ಇದು TNBC ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ರೂಪಾಂತರಗಳ ಬಗ್ಗೆ ಸಂಬಂಧಿತ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಆರೋಗ್ಯ ಪೂರೈಕೆದಾರರಿಗೆ ಒದಗಿಸಬಹುದು, ಇದು ಅವರ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಕೋರ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಸಂಯೋಜಿತ ತಂತ್ರವು ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, TNBC ರೋಗನಿರ್ಣಯಕ್ಕಾಗಿ ಈ CRISPR/Cas-PCR ವಿಧಾನವನ್ನು ಆರೋಗ್ಯ ರಕ್ಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ವ್ಯಾಪಕವಾದ ಸಂಶೋಧನಾ ಪ್ರಯತ್ನಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ (ಯಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು, 2019).